[發明專利]一種液質聯用測定血漿中非洛地平濃度的方法

在審

• 申請號: 202011600912.4
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112782310A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 范志鴻
• 申請（專利權）人: 徐州立興佳正醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京淮海知識產權代理事務所(普通合伙) 32205
• 代理人: 李妮

本發明公開了一種液質聯用測定血漿中非洛地平濃度的方法，采用液質聯用系統測定，先取待測樣本，加入一定量的混合有機溶劑進行萃取，預處理后，經色譜柱分離，用質譜檢測器檢測。本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為非洛地平的血藥濃度測定提供依據；本方法的血漿標準曲線線性范圍為0.02～4ng/mL，批內和批間精密度RSD均小于±15％，適合于測定血漿中非洛地平的濃度。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種藥物的測定方法，特別涉及一種液質聯用測定血漿中非洛地平濃度的方法。

背景技術

非洛地平是治療高血壓的有效藥物，這種片劑既可單獨使用或與其他抗高血壓藥物合并使用。高血壓是引起動脈粥樣硬化和血管重塑的重要危險因素之一，高血壓與內皮舒張功能障礙之間存在密切關系。近代高血壓的治療目標強調降壓的同時，應注重逆轉血管的重塑，改善血管內皮細胞功能保護或恢復受損的內皮功能，從而大大減少臨床心腦血管病的發生。

非洛地平緩釋片是屬于鈣通道阻滯劑又稱鈣拮抗劑，而緩釋片屬于長效制劑，非洛地平緩釋片具有降血壓的作用，降壓作用主要通過阻滯細胞外鈣離子經電壓依賴L型鈣通道進入血管平滑肌細胞內，減弱興奮-收縮偶聯，降低阻力血管的收縮反應性。

非洛地平緩釋片有較好的降壓療效，高納攝入不影響降壓療效，還具有抗動脈粥樣硬化的作用，使用后會引起心率增快、面部潮紅、頭痛下肢水腫等不良反應。目前，現有關于非洛地平測定方法的速度、精度、靈敏度、選擇性均有待提高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種液質聯用測定血漿中非洛地平濃度的方法，該方法可提高檢測的靈敏度、精度、選擇性和速度。

為實現上述目的，本發明提供一種液質聯用測定血漿中非洛地平濃度的方法，血漿樣本經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣本預處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以非洛地平-d3為內標；于96深孔板中精密加入200μL的血漿樣本，加入10μL體積比為1：1的乙腈水溶液，混勻后加入10μL的0.08ng/μL的內標非洛地平-d3溶液，混勻后加入800μL的乙腈，渦旋混合10min，于20℃以4000rpm離心10min，取上層清液700μL至另一96深孔板中，于純凈氮氣流下，40℃蒸發干燥至少30min后，再向96深孔板中加入250μL混合有機溶劑，渦旋混勻10min，于20℃以4000rpm離心5min后作為測試樣本待檢測；其中：混合有機溶劑為乙腈：水：甲酸：1M醋酸銨混合得到的混合溶液；以上過程均需于黃光條件下操作；

(2)試樣測定：

取20μL測試樣本注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，檢測樣本中非洛地平和內標非洛地平-d3的色譜峰，并據此計算所述血漿樣本中的非洛地平濃度。

液相色譜測定條件為：色譜柱為Waters Xbridge-C18，柱規格為2.1×50mm；色譜柱溫為40℃；流動相A為水：甲酸：1M醋酸銨按照體積百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；流動相B為乙腈：甲酸：1M醋酸銨按照體積百分比100：0.2：0.1混合得到的混合物；洗液為乙腈：水按照體積百分比50：50混合得到的混合物；自動進樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進樣量為20μL，分析時間3.5min；