[發明專利]一種檢測布魯氏菌阿米卡星耐藥性RT-PCR試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 202011598557.1
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN113186308B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 楊曉雯;姜海;趙鴻雁;樸東日;田國忠;范玉
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

一種檢測布魯氏菌阿米卡星耐藥性RT?PCR試劑盒及其使用方法，屬于生物技術領域。該試劑盒包括A液(RT?PCR緩沖液、RT?DNA聚合酶和滅菌雙蒸水)、B液(引物對、探針)、陰性質控標準品和陽性質控標準品組成，其中包括用于檢測布魯氏菌的特異性引物對seq ID No.1和seq ID No.2以及探針seq ID No.3，以及檢測布魯氏菌阿米卡星耐藥性的特異性引物對seq ID No.4和seq ID No.5以及探針seq ID No.6。該RT?PCR試劑盒實用性強，耗時短，可重復性好，通過RT?PCR擴增后，能夠快速、有效、直觀的鑒別臨床樣品中是否含有阿米卡星耐藥性的布魯氏菌。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種檢測布魯氏菌阿米卡星耐藥性RT-PCR試劑盒及其使用方法

背景技術

布魯氏菌(Brucella)是一種兼性胞內寄生菌，屬于“B類生物恐怖主義藥劑”，通過寄生于宿主的免疫系統造成宿主持續性感染，并且能引起全球性人畜共患病—布魯氏菌病(以下簡稱布病)。布病影響公共衛生安全，其主要表現為發熱、多汗、乏力、關節疼痛等，嚴重者使患者喪失勞動能力，最終影響經濟發展[1]。《中華人民共和國傳染病防治法》將布魯氏菌病與“非典”、炭疽、艾滋病、狂犬病等均歸為乙類傳染病。常見引起人間布病感染的布魯氏菌主要是羊種(B.melitensis)、牛種(B.abortus)、豬種(B.suis)和犬種(B.canis)。據統計，全球人間布魯氏菌病發病率年平均超過50萬例，一些流行國家每百萬人口的布魯氏菌發病率超過100[2]，中東地區每百萬人口的布魯氏菌病發病率均在200以上，敘利亞發病率最高(1603.4)，但據世界衛生組織(WHO)調查表明，實際發病率是報告的10-25倍[3]。我國布魯氏菌病首次報道于內蒙古[4]，人間布魯氏菌病疫情于1957-1963年和1969-1971年出現兩次流行高峰。自20世紀90年代中期開始，布魯氏菌病疫情在國內再次肆虐，并從北方擴展到南方[5]，全國32省市自治區均有病例報道[6]。現有的研究表明，我國布魯氏菌病主要分布于內蒙古、新疆等畜牧業發達的省市及自治區，農牧民、獸醫、屠宰工等感染和發病率較高。

布魯氏菌藥物敏感性檢測需要在生物安全三級實驗室內進行，長期以來，我國在布魯氏菌耐藥性檢測方面所做工作不多。目前的研究表明，世界范圍內出現了部分利福平耐藥布魯氏菌菌株[7]。阿米卡星作為部分地區治療布病的藥物，如果患者感染的布魯氏菌菌株存在阿米卡星抗性，則嚴重影響患者的布病治療。本方法利用布魯氏菌分離株阿米卡星耐藥表型和基因型的相關性，分析其基因組水平的阿米卡星耐藥機制，結合RT-PCR方法，通過篩選確實可行的耐藥基因檢測序列，用于布魯氏菌阿米卡星抗性的檢測。本發明涉及儀器常見，成本較低，無需經過測序，通過目測熒光擴增曲線即可確定菌株的阿米卡星抗性，方法可應用于臨床鑒別，切實為我國布魯氏菌藥物敏感性水平提供技術保障。

參考文獻

1.Nelson-Jones A.Brucellosis[J].Postgrad Med J,1952.28(324):529-34.https://doi.org/10.1136/pgmj.28.324.529

2.Bukhari E E.Pediatric brucellosis.An update review for the newmillennium[J].Saudi Med J,2018.39(4):336-341.https://doi.org/10.15537/smj.2018.4.21896

3.Hasanjani Roushan M R and Ebrahimpour S.Human brucellosis:Anoverview[J].Caspian J Intern Med,2015.6(1):46-7.