[發明專利]診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的引物及方法

在審

• 申請號: 202011598219.8
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112646918A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 房經貴;王晨;朱旭東;李上云
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 丁靜靜

1.診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的引物，其特征在于，包括檢測VvKUP1基因、VvKUP2基因和VvSIRK基因的引物。

2.根據權利要求1所述的診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的引物，其特征在于，檢測VvKUP1基因引物如下：

VvKUP1-F：5'-TTGCTGATGTTGGCCACTTC-3'；

VvKUP1-R：5'-TCCGGAGAAAAGAGGCTTGT-3'。

3.根據權利要求1所述的診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的引物，其特征在于，檢測vKUP2基因的引物如下：

VvKUP2-F：5'-TGAAATCAGTGCCAGTCCCT-3'；

VvKUP2-R：5'-TGAAATCAGCCAGCCTACCA-3'。

4.根據權利要求1所述的診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的引物，其特征在于，檢測VvSIRK基因的引物如下：

VvSIRK-F：5'-TACCCGGATCCAGAACGAAC-3'；

VvSIRK-R：5'-TCTCAGCATGCAAGTCTCCA-3'。

5.一種診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)葡萄果皮褪綠期，提取葡萄葉片的總RNA；

(2)將步驟(1)得到的總RNA反轉錄為cDNA；

(3)以步驟(2得到的cDNA為模板，SEQ ID NO.：1～2、SEQ ID NO.：3～4、SEQ ID NO.：5～6所示的序列為引物，進行熒光定量PCR，測定VvKUP1、VvKUP2和VvSIRK三個基因的Ct值分別達到2.4356、1.8308和2.0907，VvKUP1/VvSIRK＝1.0210和VvKUP2/VvSIRK＝1.6935，且當VvKUP1和VvKUP2的Ct值明顯上升，VvSIRK的Ct值明顯下降，且VvKUP1/VvSIRK和VvKUP2/VvSIRK的值均大于1時，為葡萄轉色肥最佳施用時期。

6.根據權利要求5所述的診斷葡萄轉色肥最佳施用時期的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR的擴增體系如下：1μLcDNA，上、下游引物各0.4μL，10μL緩沖液，8.2μLddH₂O；

所述熒光定量PCR的擴增程序如下：94℃30sec；94℃5sec，60℃15sec，72℃10sec，40個循環。