[發明專利]銀杏葉滴丸HPLC-VWD-ELSD特征圖譜的建立方法及其特征圖譜

有效

• 申請號: 202011597316.5
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112903887B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 李萍;楊華;吳丹丹;高雯;瞿城;王青青;盛雪萍;張建兵
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學;萬邦德制藥集團有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/86;G01N30/14;G01N30/74
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

本發明涉及中藥特征指紋圖譜分析方法，具體涉及銀杏葉滴丸HPLC?VWD?ELSD特征圖譜的建立方法，及其所得到的特征圖譜。本發明公開了一種銀杏葉滴丸HPLC?VWD?ELSD特征圖譜的建立方法，所述建立方法包括供試品溶液的制備、特征圖譜測定條件的建立及測定，上述特征圖譜通過對照品共指認了11個特征共有峰。本發明使用超濾管進行樣品前處理，能夠基本除去輔料聚乙二醇4000(PEG4000)，減少了其在ELSD色譜圖中對內酯類成分響應的影響。

技術領域

本發明涉及中藥特征指紋圖譜分析方法，具體涉及銀杏葉滴丸HPLC-VWD-ELSD特征圖譜的建立方法，及其所得到的特征圖譜。

背景技術

銀杏葉滴丸收載于《中國藥典》2020年版(第一部)，由銀杏葉提取物與聚乙二醇4000加熱溶化，混勻，滴入甲基硅油冷卻劑中，除去表面油跡，或包薄膜衣制備而成，主要用于瘀血阻絡引起的胸痹心痛、中風、半身不遂，舌強語謇；冠心病穩定性心絞痛、腦梗死見上述證候者。

中藥特征指紋圖譜是指中藥材或其制劑經適當的處理后，通過一定的分析方法，得到能夠反映其化學特征的色譜圖或光譜圖。色譜指紋圖譜能夠很好地反映中藥的綜合性和復雜性，是評價中藥真實性和一致性的有效方法。

黃酮類及內酯類成分是銀杏葉滴丸中的主要化學成分，也是《中國藥典》中含量測定的指標成分，目前銀杏葉滴丸的質量控制方法主要是對黃酮類及內酯類成分進行單獨測定，或者建立單類成分的指紋圖譜。因為黃酮類成分有很好的紫外吸收，但內酯類沒有紫外吸收，所以使用紫外檢測器與蒸發光散射檢測器聯用可以同時檢測黃酮類和內酯類成分，建立銀杏葉滴丸的HPLC-VWD-ELSD特征圖譜，可以從整體角度對銀杏葉滴丸的化學成分進行全面表征。

發明內容

為了實現上述目的，本發明提供銀杏葉滴丸HPLC-VWD-ELSD特征圖譜的建立方法，包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：

超濾膜的預處理：取400μL的50％甲醇于密理博超濾管中(外管1.5mL，3K)中，15000r，離心20min，棄去濾出液，再將內管反置于外管中，1000r，離心1min，除凈內管內液體。

取銀杏葉滴丸適量，研細，取粉末0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇20mL，超聲處理60min(40KHz,500W)，取出，冷卻至室溫，搖勻，15000r，離心20min，取400μL的上清液置于預處理過的超濾管中，15000r，離心20min，取濾出液收集管中的溶液，即得。

(2)對照品溶液的制備：取對照品白果內酯、銀杏內酯J、銀杏內酯C、銀杏內酯A、銀杏內酯B、蘆丁、槲皮素-3-O-葡萄糖基(1→2)鼠李糖苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、水仙苷、槲皮素-3-O-2-(6-p-香豆酰基)-葡萄糖基-鼠李糖苷及山奈酚-3-O-2-(6-p-香豆酰基)-葡萄糖基-鼠李糖苷適量，加50％甲醇制成適當濃度的母液，經適當稀釋制成最終濃度介于10μg/mL～100μg/mL的混合對照品溶液。

(3)紫外-蒸發光散射檢測器聯用法測定：色譜柱：Agilent?InfinityLabPoroshell?120EC-C18(3.0×150mm,2.7μm)；流動相：以0.05％甲酸水溶液為流動相A，以乙腈-甲醇(8：2)為流動相B，按下表進行梯度洗脫，流速：0.4mL/min，柱溫：35℃，檢測波長：360nm；蒸發光散射檢測器：N₂流速：1.2SLM，蒸發管溫度：80℃；霧化器溫度：80℃。

(4)特征圖譜的建立：將20批銀杏葉滴丸分別按照上述步驟(1)制成供試品溶液，注入高效液相色譜儀中，按照上述步驟(3)的色譜條件進行檢測，分別記錄色譜圖，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2012版”軟件進行分析，得到銀杏葉滴丸的VWD-ELSD標準指紋圖譜(R)，確定了11個共有峰，內酯類以峰1(白果內酯)為參照峰，黃酮苷類以峰4(蘆丁)為參照峰。