[發(fā)明專利]產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌C18的篩選及其微生物制劑的天然纖維素降解方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011597034.5
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112725226B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝珍玉;吳金萍;徐雪妮;龍昊;蔡曉霓;任偉
• 申請（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/07;C02F103/20
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發(fā)明涉及微生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及產(chǎn)纖維素酶的海洋細(xì)菌及其微生物制劑和天然纖維素的降解方法。該海洋細(xì)菌的保藏編號為CCTCC NO：M 2020620。本發(fā)明篩選到的海水細(xì)菌適用于海南熱帶海洋環(huán)境，且具有高效纖維素降解能力，可降解甘蔗渣等天然維生素，達(dá)到經(jīng)濟(jì)廉價(jià)可以長期投放的效果，為開發(fā)產(chǎn)纖維素酶海洋微生物制劑和對蝦海水養(yǎng)殖模式中充分利用廉價(jià)天然纖維素作為人工碳源奠定菌種基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及產(chǎn)纖維素酶的海洋細(xì)菌及其微生物制劑和天然纖維素的降解方法。

背景技術(shù)

在凡納濱對蝦養(yǎng)殖過程中，因投入的蛋白質(zhì)餌料增加，養(yǎng)殖水體的氨氮和亞硝酸鹽含量常超標(biāo)，導(dǎo)致水體碳氮比失衡，嚴(yán)重影響了對蝦的養(yǎng)殖。養(yǎng)殖過程中，人工碳源的添加可起到平衡水體碳氮比的作用。

中國甘蔗種植面積廣，產(chǎn)量大，具有豐富的甘蔗渣資源，且價(jià)格低廉，較易獲得。甘蔗渣中的纖維素可緩慢分解為葡萄糖，能源源不斷地提供碳源，提高水體碳氮比，利于養(yǎng)殖環(huán)境中有益菌的生長，促進(jìn)生物絮團(tuán)的形成，改善水質(zhì)，同時(shí)可被對蝦攝食，使對蝦獲得更好的生長效果。

產(chǎn)纖維素酶菌是一種能產(chǎn)生纖維素酶降解纖維素生成葡萄糖的一種細(xì)菌。產(chǎn)纖維素酶菌所產(chǎn)生的纖維素酶可將甘蔗渣中的纖維素快速降解為葡萄糖，可更為快速、更為直接的提供碳源。如公開號CN103468602A發(fā)明公開了一株產(chǎn)纖維素酶芽孢桿菌(Bacillussp.)H1，保藏編號為CGMCCNo.7395。該發(fā)明方法簡單快速，易于實(shí)施，對研究纖維素酶作用機(jī)理及纖維素酶制劑的生產(chǎn)具有潛在理論和應(yīng)用價(jià)值。又如公開號CN102586133A發(fā)明公開了一株產(chǎn)生纖維素酶的芽孢桿菌屬(Bacillussp.)菌株和利用此菌株生產(chǎn)纖維素酶的生產(chǎn)方法，經(jīng)過培養(yǎng)基優(yōu)化篩選及發(fā)酵工藝條件優(yōu)化控制，確立了穩(wěn)定的發(fā)酵方法，生產(chǎn)的纖維素酶制劑具有良好的酶活性。

研究表明，產(chǎn)纖維素酶菌等水產(chǎn)益生菌具有地理種群的特殊性。由于我國內(nèi)陸地區(qū)和海南島的環(huán)境、氣候有明顯的差異，導(dǎo)致許多水產(chǎn)益生菌在海南島的使用效果不明顯?，F(xiàn)有常見水產(chǎn)益生菌并不適合利用纖維素?，F(xiàn)有的產(chǎn)纖維素酶菌也主要集中在陸源纖維素功能菌的篩選。因此尋找適用于海南熱帶海洋環(huán)境且產(chǎn)纖維素酶的海水細(xì)菌迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了產(chǎn)纖維素酶的海洋細(xì)菌及其微生物制劑和天然纖維素的降解方法。本發(fā)明首次獲得高纖維素酶活、安全無害、遺傳穩(wěn)定、耐受性明確和高甘蔗渣腐解率的海洋土著細(xì)菌，為后續(xù)適用于海南環(huán)境微生態(tài)制劑的制備和構(gòu)建基于人工添加碳源的凡納濱對蝦等海洋水產(chǎn)海水養(yǎng)殖模式提供新思路。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種產(chǎn)纖維素酶的海洋細(xì)菌，其保藏編號為CCTCC NO：M 2020620。

作為優(yōu)選，海洋細(xì)菌的篩選方法包括：采集海草床附近3cm以下底質(zhì)泥樣，涂布于2216E海水瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)、純化，得到產(chǎn)纖維素酶的海洋細(xì)菌。

作為優(yōu)選，2216E海水瓊脂培養(yǎng)基的組成為：0.5%胰蛋白，0.1%酵母，0.01‰磷酸鐵，1.7％瓊脂，水余量。

作為優(yōu)選，培養(yǎng)的溫度為30℃，培養(yǎng)的時(shí)間為15~30h。

優(yōu)選地，培養(yǎng)的時(shí)間為18h。

本發(fā)明還提供了一種天然纖維素的降解方法，包括：將上述海洋細(xì)菌接種于2216E液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，得到培養(yǎng)上清液；將所得培養(yǎng)上清液與天然纖維素混合，酶解。

作為優(yōu)選，培養(yǎng)的溫度為30℃，培養(yǎng)的時(shí)間為12~16h。

作為優(yōu)選，酶解的pH值為4.6~5.0，酶解的溫度為48~52℃，酶解的時(shí)間為0.5~2h。

優(yōu)選地，酶解的pH值為4.8，酶解的溫度為50℃，酶解的時(shí)間為1h。