[發明專利]一種血漿外泌體miRNA生物標記物及其應用

有效

• 申請號: 202011596715.X
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112575088B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 陸燕;劉鵬淵;呂衛國;周蘭韻
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬婦產科醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 劉靜

本發明公開了一種血漿外泌體miRNA生物標記物及其應用，所述miRNA生物標記物包括miR?15a?5p，miR?106b?5p，和miR?107中的一種或多種，具有在制備子宮內膜癌篩查診斷的試劑盒中的應用。在202個測試樣本中，通過3個外泌體miRNAs的表達量就能區分子宮內膜癌患者和健康志愿者(AUC＝0.873)，還能和腫瘤標志物CEA以及CA125進行聯合(AUC＝0.904)，達到更高的靈敏度和特異性。同時，這三個miRNAs在早期診斷(I期內膜癌患者的診斷)中也有作用，在ROC曲線中它們的聯合AUC值為0.869，和腫瘤標志物聯合后可進一步提升至0.915。本發明制備的試劑盒由特異性擴增引物以及通用PCR擴增試劑組成，具有較高的臨床價值，可以有效用于子宮內膜癌的篩查診斷，包括早期篩查。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種血漿外泌體miRNA生物標記物及其在制備子宮內膜癌篩查診斷的試劑盒中的應用。

背景技術

一直以來，癌癥都是中國乃至世界主要的公共衛生問題。子宮內膜癌作為婦科癌中的常見類型，發病率和死亡率也在逐年攀升。根據Globocan 2018的數據，在中國，子宮內膜癌的發病率和五年流行率均婦科腫瘤中排名第二。2018年大概診斷出了73253個新病例。子宮內膜癌的危險因素包括年齡，肥胖，月經周期增加，高脂飲食和遺傳等。目前對子宮內膜癌的診斷的金標準(gold standard)還停留在組織活檢。然而，由于宮頸狹窄，活檢具有一定的風險性，侵襲性并且有時候對操作的技術有所要求。此外，在之前的研究中已經顯示子宮內膜癌具有腫瘤內異質性，這意味著在活檢中，可能會丟失一些有價值的信息，比如一些腫瘤亞型。

因此，需要開始關注液體活檢，與傳統方法相比，液體活檢具有無創性，且易于獲得，得到的信息也更加全面。一般來說，液體活檢主要包括循環腫瘤蛋白，循環腫瘤核酸，循環腫瘤細胞，胞外囊泡和腫瘤血小板。其中胞外囊泡因數量和內容物由脂質膜包裹而具有的穩定性脫穎而出。胞外囊泡主要分為直徑較大的微囊泡和直徑較小的外泌體。

外泌體是一種納米級脂質雙分子囊泡，可以包裹生物分子(例如蛋白質，脂質，DNA，RNA和miRNA)，在循環中維持其完整性，并將其轉移至受體細胞。研究表明，對于同一器官，癌細胞比正常細胞產生更多的外泌體。而miRNA是外泌體中最富集的RNA類型。同時，外泌體miRNA已經被證實通常具有腫瘤特異性，并且在前列腺癌，宮頸癌，結直腸癌和肺癌中都被研究確定為癌癥篩選，診斷和檢測的生物標志物。

發明內容

基于上述背景，現有的子宮內膜癌診斷方式仍存在一些不足，本發明旨在提供一種血漿外泌體miRNA生物標志物及在子宮內膜癌診斷的微滴式數字PCR試劑盒中的應用，在數據上展現出較高的靈敏度和特異性，并彌補了傳統方法的風險性和有創性。

本發明采用了3個miRNAs及其聯合效率作為子宮內膜癌篩查的生物標志物。用微滴式數字PCR定量每個樣本中的miRNA拷貝數，在靈敏度上優于傳統的qRT-PCR。同時，本發明還提出了用于檢測這3個miRNAs的診斷試劑盒及檢測方法，所述試劑盒由特異性擴增引物以及通用PCR擴增試劑組成，具有較高的子宮內膜癌診斷臨床應用價值。

本發明所提供的技術方案：一種血漿外泌體miRNA生物標記物，所述miRNA生物標記物包括miR-15a-5p，miR-106b-5p和miR-107中的一種或多種。miR-15a-5p序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，miR-106b-5p序列如序列表中SEQ ID NO：2所示，miR-107序列如序列表中SEQ ID NO：3所示。

進一步地，所述miRNA生物標記物包括miR-15a-5p、mir-106b-5p、miR-107中兩種或兩種以上的組合。

進一步地，所述miRNA生物標記物還包括其與腫瘤標志物癌胚抗原(CEA)和癌抗原125(CA125)的聯合。

進一步地，所述血漿外泌體miRNA生物標記物標準化的內參為miR-26a-5p和let-7b-5p。