[發明專利]一種LILRB4和B7-H3雙靶向的嵌合抗原受體及其應用

有效

• 申請號: 202011596313.X
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112552414B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 朱建高;楊文君
• 申請（專利權）人: 浙江康佰裕生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京沁優知識產權代理有限公司 11684
• 代理人: 姜宇

本發明涉及嵌合抗原受體領域，公開了一種嵌合抗原受體。所述嵌合抗原受體包含依次連接的抗LILRB4單鏈抗體、抗B7?H3單鏈抗體、人CD8鉸鏈跨膜區、人4?1BB胞內區、人CD3ζ胞內區、人P2A肽和人IFN全長。細胞學實驗結果表明，表達所述嵌合抗原受體的T細胞，對腫瘤細胞的殺傷效果優于單靶點同類型CAR?T。動物實驗結果表明，表達所述嵌合抗原受體的T細胞，可以顯著延長動物的生存率，效果優于單靶點同類型CAR?T。本發明還公開了一種LILRB4和B7?H3雙靶向的嵌合抗原受體的應用，用于制備治療急性髓細胞白血病的藥物。

技術領域

本發明涉及嵌合抗原受體技術領域，尤其是涉及一種LILRB4和B7-H3雙靶向的嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞治療由于在血液腫瘤中取得了顯著療效，正在成為一種富有前景的免疫治療策略。CAR-T細胞指的是一種經過人工基因改造的在細胞表面表達嵌合型抗原受體(CAR)的T細胞。CAR是CAR-T的核心部件，賦予T細胞以組織相容性抗原(HLA)非依賴的方式識別腫瘤表面腫瘤相關抗原(TAA)的能力。因此，CAR-T細胞在體內能特異性靶向表達有TAA表面標記的腫瘤細胞，并通過激活T細胞免疫反應殺傷腫瘤細胞。2010年，首例B細胞淋巴瘤患者接受靶向CD19的CAR-T細胞治療并取得了令人振奮的積極效果。此后，越來越多的研究組通過臨床試驗證實了CAR-T技術治療B細胞血液腫瘤的安全性和有效性。

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是成人中最常見的、死亡率最高的一類白血病，在治療上仍面臨著挑戰。目前，急性髓細胞白血病的治療仍以化療為主，病人達到完全緩解后橋接異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)。該方法可以使部分AML患者獲得完全緩解，對于接受allo-HSCT的AML患者，5年無病生存期(Disease-free survival，DFS)可達到40-50％。但是，大約有43％的患者接受首次化療后復發，而復發患者僅有一半能獲得完全緩解，復發情況下的存活率低于15％。再者，有18％的患者在經歷多次化療誘導后仍無法達到完全緩解。

目前世界范圍內有記錄的CAR-T相關臨床試驗已超過1000項，并且有三款CAR-T產品被FDA批準上市，分別用于治療急性B細胞白血病(B-ALL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)和套細胞淋巴瘤(MCL)。然而，由于髓系血液腫瘤的異質性，目前CAR-T療法在AML的治療方面的進展情況并不理想。已經開展的靶向CD33，CD123等靶點的CAR-T療法，在臨床應用中普遍出現不同程度的造血系統損害。究其原因，主要是以上所述靶點均在正常造血祖細胞中有不同程度表達，所以CAR-T細胞在體內的持續存留可能對于造血系統造成不可逆轉的脫靶毒性。

CAR-T細胞治療在臨床實踐中，另一個亟待解決的重要問題是復發。在接受CD19CAR-T治療并獲得完全緩解的急性B淋巴細胞白血病患者中，大約有30-50％的患者最終復發，其中大多數患者在首次治療后1年內復發。復發分為兩種情況，CD19陽性腫瘤復發及CD19陰性腫瘤復發。接受CD19 CAR-T治療的病例中，超過60％的復發是CD19陰性，即由于腫瘤細胞丟失CD19表面抗原引起。

因此，本技術領域亟需開發一種既能追殺發生抗原逃逸的急性髓系白血病腫瘤細胞又不會對造血系統造成不可逆轉的脫靶毒性的CAR-T產品。

發明內容

本發明的目的之一在于提供了一種LILRB4和B7-H3雙靶向的嵌合抗原受體。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種LILRB4和B7-H3雙靶向的嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列包括：

依次連接的抗LILRB4單鏈抗體、抗B7-H3單鏈抗體、人CD8鉸鏈跨膜區、人4-1BB胞內區、人CD3ζ胞內區、人P2A肽和人IFN蛋白肽；或

具有所述氨基酸序列經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有相似生物活性的嵌合抗原受體。