[發明專利]一種丙谷二肽的分離純化方法

在審

• 申請號: 202011595873.3
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN114685600A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 何嘉俊;朱程軍;張凱莉;李建華;李敬;唐鵬;查麗燕;蘇海霞;郭麗萍;黃蕾;凡佩;張吉書;楊磊;劉莎
• 申請（專利權）人: 武漢遠大弘元股份有限公司
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K1/30
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

本發明提供了一種丙谷二肽的分離純化方法，其包括以下步驟：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶劑，所述溶劑包括氫氧化鈉的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降溫后離心即可。使用本發明的分離純化方法分離純化丙谷二肽時，能夠有效去除三肽、四肽、以及多肽雜質，所得丙谷二肽的收率高且純度高，并且對設備和工藝環境要求較低，更適于工業化生產。

技術領域

本發明涉及一種丙谷二肽的分離純化方法。

背景技術

丙谷二肽(Alanyl Glutamine)，化學名為N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(見式1)，分子式：C₈H₁₅N₃O₄，分子量：217.15。本品為白色結晶性粉末；無臭無味；易溶于水、甲酸，不溶于乙醇、甲醇、丙酮和乙醚。

谷氨酰胺是一種條件必需氨基酸，是生物體合成核酸、蛋白質、嘌呤、嘧啶等的重要前體物質,也是蛋白質合成與分解的調節物。但谷氨酰胺本身由于不穩定、水溶性低而不能直接作為藥物，只有將其轉化為穩定的衍生物才能充分發揮谷氨酰胺對人體的作用。Peter Furst等發現丙氨酰谷氨酰胺(簡稱丙谷二肽)是谷氨酰胺理想替代品并于1995年將其開發為腸外營養用藥。該藥物具有促進肌肉蛋白合成、改善危重病人的臨床與生化指標、維持腸道功能、保持機體氮平衡、增強免疫系統等作用，尤其在對大面積突發性創傷的病人具有重要的營養支持作用，目前在歐美等被廣泛使用。

丙谷二肽的合成方法早期為化學合成法，但化學法合成，存在步驟較長，用到的化學試劑較多等問題，限制了其工業化應用。

近年來由于日本科學家Yokozeki和Hara等在酶技術上的突破(Yokozeki K.,HaraS.,Journal of Biotechnology,2005,115(02):211-220.)，采用酶法合成丙谷二肽能夠直接以L-丙氨酸和L-谷氨酰胺為底物在酶催化的作用下一步合成丙谷二肽，與之前的化學合成法相比技術上，成本上、安全上都取得飛躍性突破，但是該技術路線會產生難以去除的三肽雜質丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺、四肽雜質丙氨酰丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺和其它多肽類雜質。在目前的工藝技術中大家多采用2～3倍體積水溶劑丙谷二肽粗品，再加入大量的甲醇進行除雜和精制。中國專利CN110407914A公開了一種丙谷二肽的分離提純方法，即粗品溶解于3倍量的水中，再加入0.1～50％的酸性物質，30～80℃加熱攪拌，加入6倍水量的甲醇析晶，65℃減壓干燥得純化的精制品，純度最高達到99.83％，單個雜質小于0.1％。該技術使用了粗品12倍水量的甲醇，資源浪費較大，對設備和工藝環境要求較高，且除雜效果不佳。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術中去除制備丙谷二肽時產生的三肽、四肽、以及多肽雜質時資源浪費較大從而成本較高、對設備和工藝環境要求較高且除雜效果不佳等缺陷，提供了一種丙谷二肽的分離純化方法。使用本發明的分離純化方法分離純化丙谷二肽時，能夠有效去除三肽、四肽、以及多肽雜質，所得丙谷二肽的收率高且純度高，并且對設備和工藝環境要求較低，更適于工業化生產。

本發明人經過大量研究后意外發現，當采用甲酸作為丙谷二肽的良溶劑，以氫氧化鈉的醇溶液進行析晶時，能夠有效去除三肽、四肽、以及多肽雜質，且有效提高所得丙谷二肽的收率和純度。此外，本發明還可進一步同時采用氫氧化鈉的醇溶液和小極性溶劑(例如正庚烷等)的混合溶劑進行析晶，能夠使得析晶效果更佳，從而能夠大大減少相關溶劑的用量，從而降低成本。

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種丙谷二肽的分離純化方法，其包括以下步驟：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶劑以使得所述丙谷二肽粗品進行析晶，所述溶劑包括氫氧化鈉的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降溫后離心即可。