[發(fā)明專利]一種EBV特異性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011588232.5
• 申請(qǐng)日: 2020-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN112626015B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂曉菲;張慧慧;譚毅;李想
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省齊魯細(xì)胞治療工程技術(shù)有限公司;銀豐生物工程集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;C12N5/0781;C12N13/00
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 牛芳

1.一種EBV特異性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：采用刺激細(xì)胞按照不同比例刺激單個(gè)核細(xì)胞，刺激培養(yǎng)3周，收獲細(xì)胞；所述刺激細(xì)胞為輻照過的EBV轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞；

EBV特異性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞的培養(yǎng)液為添加5% CTS^TM的AIM V^TM培養(yǎng)基，第1周添加50IU/mL的IL-2，第2-3周，添加200IU/mL的IL-2；

所述刺激細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞的比例每周增加；第0天起，刺激細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞的比例為1:40，第7天起為1:20，第14天起為1:5，每種比例分別刺激一周。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，培養(yǎng)過程中每3天對(duì)半更換細(xì)胞培養(yǎng)液，維持細(xì)胞密度為3.0×10⁶/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述輻照過的EBV轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞為以100Gy輻照劑量、3.0×10⁶/mL細(xì)胞輻照密度輻照BLCL細(xì)胞獲得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述輻照過的EBV轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)密度為5.0×10⁵/mL；培養(yǎng)液為添加20% FBS和1% Gluta Mix的RPMI-1640培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述單個(gè)核細(xì)胞的來(lái)源為臍血或外周血。