[發明專利]一種PCR檢測樣本的前處理液

有效

• 申請號: 202011585713.0
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112553303B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 董璐;陳威;張天;張越
• 申請（專利權）人: 中元匯吉生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
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本發明涉及分子生物學技術領域，公開了一種PCR檢測樣本的前處理液。本發明的前處理液通過添加陰離子聚合物，利用一種前處理液實現了常溫條件下樣本的保存和加熱情況下核酸的提取，無需加入磁珠、蛋白酶K或物理破碎、離心等裂解樣本，操作簡單，提取效果好，對于核酸提取的發展和應用具有重要意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種PCR檢測樣本的前處理液。

背景技術

磁珠法核酸檢測因為其較高的靈敏度，而被廣泛應用到醫療診斷中。其檢測過程主要包括，磁珠法核酸提取和PCR檢測。在磁珠法核酸提取之前需要先處理樣本，將樣本暫時保存在保存液中；通常的磁珠法核酸提取可分為四個步驟：(1)裂解；(2)結合；(3)洗滌；(4)分離。具體為細胞或組織在裂解液作用下將DNA/RNA釋放出來，經過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠與所釋放出的DNA/RNA進行特異性結合，形成核酸-磁珠復合物，后續在核酸-磁珠復合物中加入洗滌液，洗去非特異性吸附的蛋白質等雜質，去除雜質的核酸—磁珠復合物在磁場條件下分離富集磁珠，最后得到欲提取的核酸物質，提取的核酸利用PCR擴增進行檢測，分步提取，操作復雜。

目前市面上為了簡化操作，開發出全自動核酸提取儀，簡化了提取過程，但通常的保存液只能保存樣本無法實現樣本的裂解，而通常的提取液只能裂解樣本無法實現樣本的保存，且隨著臨床檢測對時間的要求，對裂解速度的需求越來越高，一旦加入樣本，樣本會立馬開始裂解，在短時間內實現樣本核酸的提取。但在實際應用中，通常樣本都需要一定時間的存儲，特別是利用儀器進行提取，上機前的樣本通常需要保持在相同的環境中，而離體的樣本很難保持其狀態，若是直接添加提取液，又會對后續的結果產生影響，所以急需要提出一種既能夠保存樣本又能夠實現核酸提取的溶液，使樣本在提取前可以保持穩定的狀態，在需要提取時可以立馬被裂解。

此外，磁分離過程需要將磁珠上連接的核酸分離出去，并不能一定保證所有的核酸均與磁珠分離，游離在溶液中，而吸附在磁珠上的核酸會對提取的核酸造成一定的損失，且磁分離之后必須將核酸提取溶液轉移出來，才能進行后續的PCR檢測，而不能直接在含有磁珠的溶液中進行PCR擴增檢測，轉移過程可能并不能完全的轉移核酸溶液造成損失，且轉移之后再放入其他的容器里，容易造成污染，所以若能實現核酸的提取和檢測為一體，去除磁分離過程的吸磁、轉移等過程，在保證靈敏度的條件下，通過更為簡單的操作實現對樣本的檢測，對于醫療診斷具有重要意義。

發明內容

本發明提供一種PCR檢測樣本的前處理液，以解決現有技術操作復雜，實現前處理液同時對樣本進行保存和核酸提取的目的，簡化操作。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術手段：

一種PCR檢測樣本的前處理液，包括，緩沖液、還原劑和水溶性陰離子型聚合物。本發明PCR檢測樣本的前處理液不包含蛋白酶K。

術語“陰離子型聚合物”,按本領域廣義的理解,指每個分子包含多個陰離子基團的聚合材料或聚合物；它包括含有至少一個選自硫酸基、硫酸根、磺酸基、磺酸根、磷酸基、磷酸根、膦酸基、膦酸根、硅酸基、硅酸根、羧酸基和羧酸根的可帶負電荷和/或帶負電荷的部分；所述的陰離子型聚合物可以是均聚物或者共聚物，當陰離子型聚合物是均聚物時，包含單一類型的重復單元；當陰離子型聚合物是共聚物時，包含兩個或者更多不同的重復單元；所述的陰離子型聚合物可以是線性聚合物，交聯聚合物，或支化共聚物。

具體地，所述陰離子型聚合物可選自多糖，如海藻酸及其鹽、透明質酸及其鹽或纖維素及其鹽(例如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基羥乙基纖維素和羧甲基纖維素)；

或者，所述陰離子型聚合物為氨基酸聚合物，如聚谷氨酸；

或者，所述陰離子型聚合物選自聚乙烯硫酸鹽、聚乙烯磺酸鹽、聚苯乙烯硫酸鹽、聚苯乙烯磺酸鹽、聚丙烯酸及其鹽、聚(甲基)丙烯酸及其鹽、硫酸葡聚糖及其鹽、硫酸軟骨素及其鹽、聚馬來酸及其鹽、聚富馬酸及其鹽、聚馬來酸酐、聚硅酸鹽。