[發明專利]一種環境雌激素的檢測方法及應用

有效

• 申請號: 202011585233.4
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112834469B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 高志賢;姚子儀;賈雪霞;黃惠;張曉雨
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院環境醫學與作業醫學研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京豐浩知識產權代理事務所(普通合伙) 11781
• 代理人: 董超

1.一種環境雌激素的檢測方法，所述環境雌激素選自雙酚A、雌二醇、多氯聯苯、丙溴磷和阿特拉津中的至少一種，其特征在于，所述檢測方法至少包括以下步驟：

S1、選擇雙酚A、雌二醇、多氯聯苯、丙溴磷和阿特拉津的適配體，并設計對應的互補鏈；

所述雙酚A適配體的互補鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，

所述雌二醇適配體的互補鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，

所述多氯聯苯適配體的互補鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，

所述丙溴磷適配體的互補鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，

所述阿特拉津適配體的互補鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

S2、將所述適配體與微球分別偶聯，得到偶聯有適配體的微球；

所述微球為羧基化磁性微球；

所述適配體為氨基化適配體或兩端分別連接有氨基和生物素的適配體；

所述適配體與所述微球偶聯時適配體溶液的濃度為：雌二醇適配體的濃度為3～5μM、阿特拉津適配體的濃度為1～3μM、丙溴磷適配體的濃度為2～4μM、多氯聯苯適配體的濃度為4～6μM、雙酚A適配體的濃度為1～3μM；

S3、將所述偶聯有適配體的微球與含有所述環境雌激素的待測樣品、互補鏈混合；先將所述偶聯有適配體的微球與含有所述環境雌激素的待測樣品反應0.5～1小時，再加入互補鏈反應0.5～1小時；

S4、再加入熒光標記物，對所述熒光標記物的熒光信號進行檢測；所述熒光標記物選自鏈霉親和素藻紅蛋白，和/或，所述鏈霉親和素藻紅蛋白的濃度為1：50～1：200。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述雙酚A適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，

所述雌二醇適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，

所述多氯聯苯適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，

所述丙溴磷適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，

所述阿特拉津適配體的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，

雌二醇適配體的濃度為4μM、阿特拉津適配體的濃度為2μM、丙溴磷適配體的濃度為3μM、多氯聯苯適配體的濃度為5μM、雙酚A適配體的濃度為2μM。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，將所述偶聯有適配體的微球保存在0.1M PBS中。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，先將所述偶聯有適配體的微球與含有所述環境雌激素的待測樣品反應0.5小時，再加入互補鏈反應0.5小時。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，反應溫度為37℃。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，所述互補鏈與所述適配體的摩爾濃度比為1：1。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，所述環境雌激素的待測樣品中雌二醇的最低檢出限為0.29pg/mL、雙酚A的最低檢出限為3.5pg/mL，多氯聯苯的最低檢出限為0.32pg/mL，丙溴磷的最低檢出限為1.93pg/mL，阿特拉津的最低檢出限為2.83pg/mL。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述鏈霉親和素藻紅蛋白的濃度為1：100。

10.如權利要求1～9任一項所述的方法在同時檢測實際水體樣品中五種環境雌激素含量中的應用。