[發明專利]一種拭子樣本核酸釋放劑

有效

• 申請號: 202011585125.7
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112980831B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 朱興彪;葛毅媛;王博;謝龍旭;李菲;郭津津
• 申請（專利權）人: 廣州凱普醫藥科技有限公司;潮州凱普生物化學有限公司;北京凱普醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發明公開了一種拭子樣本核酸釋放劑。其成分中添加了非離子表面活性劑異山梨醇二甲醚和滲透劑N?正烷基苯并異噻酮唑酮。本發明的核酸釋放劑既可快速釋放核酸，無需進行核酸的提取純化步驟，而且兼具樣本保存功能。拭子樣本采集后置于核酸釋放劑中，室溫靜置2～30min即可直接用于PCR等分子生物學實驗，且對后續核酸檢測不產生影響，采集的樣本可常溫保存14天核酸不降解，另外最低檢測限可達100copies/mL。產品安全可靠，操作簡單、快速，適用于急診、發熱門診、現場大量快速篩查等核酸檢測場景。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域。更具體地，涉及一種拭子樣本核酸釋放劑。

背景技術

常規病原微生物的核酸檢測需經過核酸提取步驟，這使得核酸檢測過程耗時 較長，不能滿足快速檢測需要。核酸釋放劑可用于快速裂解各類常見樣本，無需 核酸的提取純化步驟，樣本裂解物可直接作為模板進行擴增反應，目前已在病原 微生物檢測領域普遍使用。但現有核酸釋放劑存在操作不夠簡便，或不能同時滿 足樣本保存的需要，以及核酸釋放仍不夠快速等問題。

中國專利CN 109402240 A公開了一種核酸釋放劑、核酸PCR擴增方法和 PCR擴增試劑盒，該核酸釋放劑可在室溫下直接釋放出RNA并滿足后續檢測， 但不能同時滿足保存樣本的需要。中國專利CN 111925941 A公開了一種能夠免 提取的病毒核酸樣本保存液，但其在檢測前病毒需經56℃以上孵育30分鐘滅活， 仍不夠簡便。

因此，尤其在當前新冠防疫背景下，持續開發和優化核酸釋放劑對病原微生 物的實際檢測工作有重要意義。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是為克服上述現有核酸釋放劑產品的不足，提供 一種能快速釋放拭子樣本DNA或RNA的核酸釋放劑，當樣本采集后，立即將 樣本與核酸釋放劑混合，室溫靜置2-30min，即可吸取樣本進行核酸檢測，且不 影響后續PCR檢測反應，操作簡便，特別適合一些在急診、發熱門診等情景的 核酸檢測。同時本發明所提供的核酸釋放劑也可作為鼻咽拭子樣本的保存液，可 常溫保存14天保護核酸不被降解。

本發明的目的是提供一種拭子樣本核酸釋放劑。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

常規核酸提取試劑中的主要成分為細胞裂解劑，常用的細胞裂解劑如尿素、 SDS等的殘留會對后續PCR反應產生明顯的抑制，不能滿足核酸釋放劑的使用 要求，除上述試劑外，一些較為溫和的表面活性劑也可滿足細胞裂解的需要，因 此本發明所述核酸釋放劑中復配了多種表面活性劑。在嘗試了多種配方后，最終 確定了本發明所述核酸釋放劑的主要成分：異山梨醇二甲醚和N-正烷基苯并異 噻酮唑酮。試驗結果顯示，本發明所述核酸釋放劑能達到快速釋放核酸但不影響 后續PCR反應的要求，同時也能滿足樣本保存的需要。

優選地，所述核酸釋放劑中異山梨醇二甲醚的濃度為0.05～2g/L。

優選地，所述核酸釋放劑中N-正烷基苯并異噻酮唑酮的濃度為0.05～2g/L。

優選地，所述核酸釋放劑的pH值為7～9。

進一步優選地，所述核酸釋放劑的pH值為7.5～8.5。

優選地，所述核酸釋放劑中還含有陽離子表面活性劑、非離子表面活性劑、 酶保護劑、變性劑、酶穩定劑、Mg離子、pH調節劑。

進一步優選地，所述陽離子表面活性劑可以是CTAB、十六烷基溴化吡啶或 聚氧乙烯脂肪胺中的一種或幾種；

所述非離子表面活性劑可以是NP40、蔗糖脂肪酸酯、曲拉通、十二烷基醇 聚氧乙烯醚硫酸鈉或十二烷基硫酸銨中的一種或幾種；

所述酶保護劑可以是明膠、亞精胺或甜菜堿中的一種或幾種；

所述變性劑可以是chaps、疊氮鈉或鹽酸胍中的一種或幾種；