[發(fā)明專利]一種拭子樣本核酸釋放劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011585125.7
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112980831B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱興彪;葛毅媛;王博;謝龍旭;李菲;郭津津
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司;潮州凱普生物化學(xué)有限公司;北京凱普醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發(fā)明公開了一種拭子樣本核酸釋放劑。其成分中添加了非離子表面活性劑異山梨醇二甲醚和滲透劑N?正烷基苯并異噻酮唑酮。本發(fā)明的核酸釋放劑既可快速釋放核酸，無需進(jìn)行核酸的提取純化步驟，而且兼具樣本保存功能。拭子樣本采集后置于核酸釋放劑中，室溫靜置2～30min即可直接用于PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，且對后續(xù)核酸檢測不產(chǎn)生影響，采集的樣本可常溫保存14天核酸不降解，另外最低檢測限可達(dá)100copies/mL。產(chǎn)品安全可靠，操作簡單、快速，適用于急診、發(fā)熱門診、現(xiàn)場大量快速篩查等核酸檢測場景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種拭子樣本核酸釋放劑。

背景技術(shù)

常規(guī)病原微生物的核酸檢測需經(jīng)過核酸提取步驟，這使得核酸檢測過程耗時 較長，不能滿足快速檢測需要。核酸釋放劑可用于快速裂解各類常見樣本，無需 核酸的提取純化步驟，樣本裂解物可直接作為模板進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，目前已在病原 微生物檢測領(lǐng)域普遍使用。但現(xiàn)有核酸釋放劑存在操作不夠簡便，或不能同時滿 足樣本保存的需要，以及核酸釋放仍不夠快速等問題。

中國專利CN 109402240 A公開了一種核酸釋放劑、核酸PCR擴(kuò)增方法和 PCR擴(kuò)增試劑盒，該核酸釋放劑可在室溫下直接釋放出RNA并滿足后續(xù)檢測， 但不能同時滿足保存樣本的需要。中國專利CN 111925941 A公開了一種能夠免 提取的病毒核酸樣本保存液，但其在檢測前病毒需經(jīng)56℃以上孵育30分鐘滅活， 仍不夠簡便。

因此，尤其在當(dāng)前新冠防疫背景下，持續(xù)開發(fā)和優(yōu)化核酸釋放劑對病原微生 物的實(shí)際檢測工作有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是為克服上述現(xiàn)有核酸釋放劑產(chǎn)品的不足，提供 一種能快速釋放拭子樣本DNA或RNA的核酸釋放劑，當(dāng)樣本采集后，立即將 樣本與核酸釋放劑混合，室溫靜置2-30min，即可吸取樣本進(jìn)行核酸檢測，且不 影響后續(xù)PCR檢測反應(yīng)，操作簡便，特別適合一些在急診、發(fā)熱門診等情景的 核酸檢測。同時本發(fā)明所提供的核酸釋放劑也可作為鼻咽拭子樣本的保存液，可 常溫保存14天保護(hù)核酸不被降解。

本發(fā)明的目的是提供一種拭子樣本核酸釋放劑。

本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

常規(guī)核酸提取試劑中的主要成分為細(xì)胞裂解劑，常用的細(xì)胞裂解劑如尿素、 SDS等的殘留會對后續(xù)PCR反應(yīng)產(chǎn)生明顯的抑制，不能滿足核酸釋放劑的使用 要求，除上述試劑外，一些較為溫和的表面活性劑也可滿足細(xì)胞裂解的需要，因 此本發(fā)明所述核酸釋放劑中復(fù)配了多種表面活性劑。在嘗試了多種配方后，最終 確定了本發(fā)明所述核酸釋放劑的主要成分：異山梨醇二甲醚和N-正烷基苯并異 噻酮唑酮。試驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明所述核酸釋放劑能達(dá)到快速釋放核酸但不影響 后續(xù)PCR反應(yīng)的要求，同時也能滿足樣本保存的需要。

優(yōu)選地，所述核酸釋放劑中異山梨醇二甲醚的濃度為0.05～2g/L。

優(yōu)選地，所述核酸釋放劑中N-正烷基苯并異噻酮唑酮的濃度為0.05～2g/L。

優(yōu)選地，所述核酸釋放劑的pH值為7～9。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述核酸釋放劑的pH值為7.5～8.5。

優(yōu)選地，所述核酸釋放劑中還含有陽離子表面活性劑、非離子表面活性劑、 酶保護(hù)劑、變性劑、酶穩(wěn)定劑、Mg離子、pH調(diào)節(jié)劑。

進(jìn)一步優(yōu)選地，所述陽離子表面活性劑可以是CTAB、十六烷基溴化吡啶或 聚氧乙烯脂肪胺中的一種或幾種；

所述非離子表面活性劑可以是NP40、蔗糖脂肪酸酯、曲拉通、十二烷基醇 聚氧乙烯醚硫酸鈉或十二烷基硫酸銨中的一種或幾種；

所述酶保護(hù)劑可以是明膠、亞精胺或甜菜堿中的一種或幾種；

所述變性劑可以是chaps、疊氮鈉或鹽酸胍中的一種或幾種；