[發明專利]一種檉柳內生拮抗真菌及其分離方法和應用

有效

• 申請號: 202011582860.2
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112646733B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 雷斌;張軍高;李進;王釗英;王純武;肖麗;王劍;劉夢麗;孟謙文;蔡繼紅;梁晶;劉海洋;余浪;周小云;賴成霞;李杰;艾合買提·哈里克
• 申請（專利權）人: 新疆農業科學院核技術生物技術研究所（新疆維吾爾自治區生物技術研究中心）
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;A01N63/30;A01P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

本發明公開了一種檉柳內生拮抗真菌及其分離方法和應用，屬于農業生物防治技術領域。本發明公開的一種檉柳內生拮抗真菌HMST?1，其保藏編號為CGMCCNo.19261。本發明提供了分離篩選獲得檉柳內生拮抗真菌的方法，該菌株鑒定為鏈格孢菌，為有效防治棉花苗期根腐類病害提供了生防菌株；本發明提供了新疆檉柳內生鏈格孢菌的液體發酵液的生防功能及其代謝產物抑菌活性物質，為創制微生物農藥新制劑提供了有效成分。

技術領域

本發明涉及微生物生防技術領域，更具體的說是涉及一種檉柳內生拮抗真菌及其分離方法和應用。

背景技術

目前，我國新疆棉花生產中主要依賴各種化學農藥防治根腐類病害，存在病原菌抗藥性增加、農藥利用率低等缺點，極易造成環境污染、農藥殘留嚴重等問題，也對有益微生物的生存構成了威脅，并誘導侵染病菌抗性增強，導致其防效逐漸下降。因此，迫切需要尋找防治棉花紅腐病的替代化學農藥的施用技術及產品。

生物農藥具有選擇性強、殘留低、高效低毒、不易產生抗藥性等優點，其中，部分微生物農藥來自于植物內生真菌，其內生真菌能夠獨立產生豐富的具有多種生物活性的次生代謝產物，是天然產物的重要來源，在農作物病害生物防控中具有重要的應用潛力。因此，植物內生真菌將是開發新型生物農藥的重要微生物資源，其中利用植物內生真菌或其代謝產物對植物病菌的抑制作用就是一條重要的生防途徑。

新疆檉柳(Tamarix chinensis)生境特殊，且具有很強的抗鹽堿、抗旱、抗風沙、抗病蟲害的能力，檉柳屬植物的主要成分是多酚及其苷和鞣質類，其中多數化合物具有很好的生物活性，檉柳在開發利用方面，具有較高的藥用價值和應用前景。

因此，提供一種檉柳內生拮抗真菌及其分離方法和應用是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種檉柳內生拮抗真菌及其分離方法和應用，對挖掘利用區域微生物生防資源、促進植物病理、農藥等學科發展，以及農藥減施增效具有重要的理論和實踐意義。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種檉柳內生拮抗真菌HMST-1，其保藏編號為CGMCC No.19261，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏日期為2019年12月16日，分類命名為互隔交鏈孢霉Alternaria alternata。

進一步，一種檉柳內生拮抗真菌HMST-1的分離方法，具體步驟如下：

選擇特殊生境下特殊株型、特殊形態檉柳；精選有效嫩枝組織，室內去油去雜浸泡；滅菌剪刀剪切分段、植體消毒、無菌水清洗、無菌濾紙過火焰、PDA培養基5點法分離培養；挑取菌落、單孢分離、對峙培養篩選、試管斜面保存。

進一步，一種檉柳內生拮抗真菌HMST-1液體發酵液的制備方法，具體步驟如下：

(1)將菌株HMST-1從試管斜面轉接至PDA平板上活化，于25℃恒溫培養5-7d后，挑取菌株HMST-1菌塊于50mL的無菌水中，配制成濃度為1.0×10⁵個/mL的孢子懸浮液，備用；

(2)采用pH為7.0的PD液體培養基，以10％的接種比例在無菌條件下接入濃度為1.0×10⁵個/mL的孢子懸浮液，再加入3.0mmol/L的代謝因子KH₂PO₄，于25℃，150r/min條件下振蕩培養5d；

(3)菌株HMST-1液體發酵液經高速冷凍離心機8000r/min離心10min后，取上清液稀釋5-10倍。

進一步，所述檉柳內生拮抗真菌HMST-1在抑制棉花苗期紅腐病菌和棉花立枯病菌中的應用。