[發明專利]診斷磁珠的大規模制造方法及其生物應用

有效

• 申請號: 202011581630.4
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112725328B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 張佳斌
• 申請（專利權）人: 蘇州白堊紀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806;C08L39/06;C08K3/22
• 代理公司: 北京格允知識產權代理有限公司 11609
• 代理人: 譚輝

1.一種診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備磁性交聯聚維酮顆粒；

2)將所述的磁性交聯聚維酮修飾多孔無機二氧化硅層以制備硅基磁性交聯聚維酮顆粒；

3)將所述的硅基磁性交聯聚維酮顆粒修飾有機硅層以制備雙層硅基磁性交聯聚維酮顆粒；

其中，所述制備磁性交聯聚維酮顆粒包括如下步驟：

1-1)100-500質量份的粒徑為5-20μm的交聯聚維酮顆粒、200-500質量份的甘油、200-1000質量份的乙醇和200-1000質量份的水混合并機械攪拌0.5-1小時至分散；

1-2)通入氮氣1小時后，加入100-200質量份的二價鐵鹽、200-400質量份的三價鐵鹽和10-100質量份的分散劑；

1-3)加入50-600質量份的弱堿性溶液，升溫至40-70℃，反應2-10小時，降至室溫得磁性交聯聚維酮顆粒；

所述的交聯聚維酮顆粒為含有吡咯烷酮結構的多孔狀的結構的固體粉末顆粒；

所述的硅基磁性交聯聚維酮顆粒的具體合成步驟如下：步驟1的反應器中繼續加入100-500質量份的硅酸鈉和100-600質量份的冰乙酸溶液，室溫下繼續攪拌1-5小時，以制備硅基磁性交聯聚維酮顆粒；

所述雙層硅磁性交聯聚維酮顆粒的具體合成步驟包括：

3-1)繼續在步驟2)中的反應器下加入20-400質量份的多元醇，室溫攪拌1小時；

3-2)以流速為1-100mL/min的滴加速度，加入100-400質量份的有機硅源/乙醇混合物，滴加完畢后，繼續在室溫下攪拌反應2-10小時；

3-3)產物使用乙醇和去離子水反復沉淀清洗3-10次，在40-60℃鼓風干燥箱中烘干；

3-4)將產物加入DEPC處理的無菌水中，磁珠濃度配置為10-200mg/mL，以制備核酸提取磁珠懸浮液。

2.根據權利要求1所述的診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，所述的二價鐵鹽為硫酸亞鐵銨、氯化亞鐵、硫酸亞鐵和/或其組合，三價鐵鹽為氯化鐵、硫酸鐵、硝酸鐵和/或其組合。

3.根據權利要求1所述的診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，所述的分散劑為乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸三鈉、聚乙烯吡咯烷酮、吐溫20、Brij?56、Brij?58、聚乙二醇辛基苯基醚、Span-80、Span-20、十二烷基肌氨酸鈉、十二烷基硫酸鋰、十六醇聚氧乙烯醚二甲基辛烷基氯化銨、辛烷基聚氧乙烯基十四烷基氯化銨、辛烷基聚氧乙烯基十二烷基氯化銨、聚乙二醇8000、聚乙烯亞胺和/或其組合。

4.根據權利要求1所述的診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，弱堿性溶液為氨水、甲酰胺和/或其組合。

5.根據權利要求1所述的診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，所述多元醇為聚乙二醇200、聚乙二醇400、聚乙二醇800、聚乙二醇1000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000、季戊四醇、三羥甲基乙烷、木糖醇、山梨醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，4-丁二醇、新戊二醇、二縮二乙二醇、一縮二丙二醇、三羥甲基丙烷、一縮二乙二醇和/或其組合；

所述的有機硅源為硅酸四乙酯、四(三甲基硅氧基)硅烷、硅酸四丁酯、四甲氧基硅烷、四丙氧基硅烷、正硅酸四異丙酯和/或其組合；有機硅源/乙醇混合物的質量比為1:1-1:5。

6.根據權利要求1所述的診斷磁珠的大規模制造方法，其特征在于，所述多元醇為聚乙二醇8000、季戊四醇、三羥甲基乙烷、一縮二乙二醇和/或其組合。

7.一種診斷磁珠的應用，其特征在于，所述的診斷磁珠為權利要求1-6任一項所述的診斷磁珠；所述診斷磁珠應用于新鮮動物組織、動物組織石蠟切片、植物葉片、植物種子、全血、血漿、血清、毛發、指甲、煙蒂、唾液、拭子、細菌或病毒等生物檢材中的核酸提取及純化。