[發明專利]APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株及弱毒疫苗

在審

• 申請號: 202011576985.4
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112680391A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 諸葛祥凱;戴建君;姜敏;周洲;王忠星
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;A61K39/108;A61P31/04;C12R1/19
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本發明屬于微生物領域，公開了一株APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株及弱毒疫苗，APEC雙基因缺失株的構建方法為Red同源重組方法，對rfaH和hfq雙基因進行敲除，得到禽致病性大腸桿菌FY26ΔrfaH/hfq，保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏號為CCTCC M 2020612。本發明缺失株具有很好的生物安全性和免疫原性，且毒性較弱，可用于制備禽致病性大腸桿菌弱毒疫苗，預防禽致病性性大腸桿菌感染。本發明禽致病性大腸桿菌FY26ΔrfaH/hfq制備的弱毒疫苗，針對禽致病性大腸桿菌感染具有免疫保護力，攻毒免疫保護效果好。

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及一株APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株及由其制備的弱毒疫苗。

背景技術

禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenic E.coli,APEC)是危害養禽業的重要細菌性病原，其屬于腸道外致 病性大腸桿菌(ExPEC)。禽致病性大腸桿菌主要通過呼吸道感染家禽，導致家禽的多系統混合感染，甚至 引起禽急性死亡，對養禽業造成嚴重損失，并對食品安全構成威脅。腸道外致病性大腸桿菌具有人畜共患 潛力，對腸道外致病性大腸桿菌致病亞型進行命名，分別為尿道致病性大腸桿菌(UPEC)、敗血癥大腸桿菌 (SEPEC)、新生兒腦膜炎大腸桿菌(NMEC)和禽致病性大腸桿菌。禽致病性大腸桿菌與人源腸道外致病性大 腸桿菌臨床分離株演化關系較接近，并擁有非常相似基因組和毒力基因特征，常規的分子流行病學檢測方 法不能明顯區分不同宿主源的腸道外致病性大腸桿菌分離株。禽致病性大腸桿菌具有通過禽肉產品傳染人 類的潛力，研究表明，禽源食品攜帶的禽致病性大腸桿菌可能是人源腸道外致病性大腸桿菌的重要來源， 深入探究禽致病性大腸桿菌的致病、耐藥和傳播機制，對公共衛生安全非常重要。

近年來，大量使用抗生素導致禽致病性大腸桿菌對抗生素的耐藥性逐漸增強，優勢ST類群的禽致病 性大腸桿菌菌株呈現出兼具高致病性和廣泛耐藥的趨勢，這些ST類型包括ST95、ST131、ST48、ST117、 ST162、ST501、ST648和ST2085等。研制禽致病性大腸桿菌疫苗為禽大腸桿菌病防控提供新手段。盡管 傳統的滅活疫苗和亞單位疫苗一直在沿用，但由于免疫效果不佳，免疫途徑不方便而逐漸被弱毒活疫苗所 取代。制約弱毒疫苗研制的一個關鍵因素是缺少具有良好免疫原性、毒力低的疫苗株。因此篩選合適的毒 力基因,對菌株毒力進行致弱、減毒是獲得疫苗株的技術備受關注。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一株免疫原性好和安全性強的禽致病性大腸桿菌(APEC)雙基因 rfaH和hfq缺失菌株及其制備的弱毒疫苗，以達到安全預防禽大腸桿菌病的作用。

為了實現上述目的，本發明使用了如下技術方案：

本發明提供了一株APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株，所述APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株為禽 致病性大腸桿菌rfaH和hfq雙基因缺失株FY26ΔrfaH/hfq，其保藏在中國典型培養物保藏中心，其保藏編 號為CCTCC M 2020612。分類命名為Escherichia coli大腸桿菌，保藏地址為中國武漢武漢大學，郵編 430072，保藏日期為2020年10月20日。

進一步的，所述APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株的構建方法為：采用Red同源重組的方法對所述禽 致病性大腸桿菌FY26中的rfaH和hfq基因逐一進行敲除，得到所述禽致病性大腸桿菌rfaH和hfq雙基因 缺失株FY26ΔrfaH/hfq。

進一步的，本發明還提供了一種上述的APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株在制備防治禽大腸桿菌病的 禽致病性大腸桿菌弱毒疫苗中的應用。

進一步的，本發明還提供了一種上述的APEC雙基因rfaH和hfq缺失菌株制備得到的禽致病性大腸桿 菌弱毒疫苗。