[發明專利]一種小鼠三陰型原發膠質母細胞瘤細胞株及其應用

在審

• 申請號: 202011576942.6
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN114686433A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 陳曉釬;劉鋒;許曉紅;余上斌;陳若喬;李春陽;尹松林;張婷婷
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 武漢楚天專利事務所 42113
• 代理人: 雷速

本發明提供了一種小鼠三陰型原發膠質母細胞瘤細胞株G422^TN?GBM，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C2020267。本發明提供的小鼠三陰型原發膠質母細胞瘤細胞株具有如下分子特征：IDH1/2野生型，Chr1/19完整，TERT啟動子突變陰性，并伴有ATRX突變和Trp53突變。由該細胞株建立的膠質母細胞瘤動物模型，具有高度的可復制性和穩定性，能模擬膠質母細胞瘤臨床各階段的治療反應，能用于抗腫瘤藥物篩選，新療法臨床前療效評估，單藥及聯合治療方案療效評價，以及惡性膠質瘤早、中、晚期治療效果評估。

技術領域

本發明涉及一種細胞株，尤其涉及一種膠質母細胞瘤細胞株，具體涉及一種小鼠三陰型原發膠質母細胞瘤細胞株及其應用。

背景技術

膠質母細胞瘤(glioblastoma，GBM)是惡性程度最高的腦原發腫瘤，GBM的一個重要惡性病理特征是向周圍擴散呈浸潤性增長，與周圍正常組織界限不清，手術難以完全切除^[1]。膠質瘤術后替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)同步放化療并聯合6個月替莫唑胺輔助化療(radiotherapy，RT)，是目前新診斷膠質母細胞瘤的標準治療方案^[2]。經常規手術、放化療綜合治療后，預后差，患者的中位生存期從12個月僅延長至約15個月，即治療有效但很有限。因此，延長膠質瘤患者生存，是當前迫切的臨床需要。很多治療膠質瘤的藥物已經做了臨床前藥效評價工作，但是還未見報道能完成臨床轉化的藥物。其中的一個重要原因是臨床前藥效評價模型與患者體內膠質瘤的生物學治療特點有很大差異，使得實驗治療結果難以與臨床療效匹配。因此，建立一種穩定且符合惡性膠質瘤生物學行為及臨床常規治療反應特征的臨床前藥效評價模型是開發新藥的重要因素。即模型須符合膠質瘤呈高度侵襲性，組織學傾向原發性膠質母細胞瘤。

致癌物誘導的自發小鼠腫瘤的同種異體原位移植模型因為在遺傳組成、異質性維持、免疫環境和血腦屏障等方面的優勢，使其成為更為經濟、臨床相似度更高的臨床前藥物模型。GL261和CT-2A是當前最常用的化學致癌物誘導小鼠膠質瘤模型，常用于膠質瘤的免疫治療研究。其中，GL261原位腦腫瘤HE染色顯示腫瘤邊緣界限清晰，未見浸潤式生長^[3]，不符合膠質瘤高侵襲性的生物學行為特點。該細胞常通過體外培養擴增后再接種至小鼠顱內^[4,5]，因當前的培養技術通常會促進細胞的同質化，這不能更好的維持其異質性^[6]。經過免疫相關治療，GL261原位荷瘤小鼠更易獲得長期存活，且更易獲得免疫記憶^[4,5]。GL261原位模型最主要的缺點在于其具備中等免疫原性，與臨床GBM組織的免疫細胞浸潤特征及PD-1治療無效不符^[7]。

CT-2A模型較GL261模型具有更好的腫瘤異質性、侵襲性和治療的抵抗性，但其免疫原性還不清楚，模型和荷瘤小鼠生存時間差異^[8]。Liu等人^[9]報道當CT-2A細胞的顱內注射數量下降為5×10⁴個時，荷瘤小鼠25日內全部死亡，中位生存期反而縮短至17.5日，顯示較寬的生存時間范圍，是一種不穩定的表現；Ramachandran等人^[10]報道，同樣的顱內接種數量(5×10⁴個)，CT-2A荷瘤小鼠全部死亡時間卻推遲至40日左右；Martikainen等人^[11]報道，同樣的顱內接種數量(5×10⁴個)，中位生存期為35日左右，接種14只小鼠中有2只出現長期存活的現象。以上數據顯示，CT-2A顱內接種的穩定性存在很大的波動性，存活時間窗過長。因此在CT-2A模型中使用存活時間來判斷藥物療效可能有很大的不確定性。

發明內容

鑒于上述現有技術及GL261和CT-2A模型的應用之局限性和不足，本發明的任務是提供一種小鼠三陰型原發膠質母細胞瘤細胞株及其應用，并提供一種建立膠質母細胞瘤動物模型的方法。