[發(fā)明專利]水稻耐冷主效QTL CTS12的分子標(biāo)記引物及其標(biāo)記方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011574944.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN112662800B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅繼景;趙文龍;岑衛(wèi)建;李容柏;覃寶祥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B20/40;G16B25/20;G16B30/10
• 代理公司: 廣西南寧公平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種水稻耐冷主效QTL CTS12緊密連鎖的分子標(biāo)記M5，其特征在于：其上游引物序列如 SEQ ID NO.1 所示，其下游引物序列所SEQ ID NO.2所示。

2.如權(quán)利要求1所述水稻耐冷主效QTL CTS12緊密連鎖的分子標(biāo)記M5的標(biāo)記方法，其特征在于，包括以下步驟：

利用耐冷廣西普通野生稻DP15作為供體親本，以冷敏感水稻品種9311作為輪回親本構(gòu)建的染色體片段替換系群體(chromosome segment substitution lines，CSSLs)，通過(guò)連續(xù)回交、自交并定向選擇，在BC₅F₂代獲得穩(wěn)定遺傳的耐冷染色體片段代換系DC90；再將代換系DC90與9311雜交，獲得F₁雜交種，自交后獲得F₂分離群體， F₂分離群體通過(guò)分子標(biāo)記基因型鑒定和耐冷表型鑒定，獲得5個(gè)交換單株W1，W2，W3，W4和W5，基于9311，DC90，NC，W1，W2，W3，W4，W5的遺傳連鎖分析獲得所述的分子標(biāo)記M5。

3.如權(quán)利要求1所述水稻耐冷主效QTL CTS12緊密連鎖的分子標(biāo)記M5的鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1) 以待鑒定水稻材料全基因組DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若擴(kuò)增出261 bp的擴(kuò)增片段，則表明有苗期耐冷主效QTL CTS12存在；

(2) 所述PCR的反應(yīng)體系如下：

上游引物 (10 μM) 0.3 μL

下游引物 (10 μM) 0.3 μL

dNTPs (2 mM) 2.0 μL

DNA模板 (100 ng/μL) 1.0 μL

KOD FX DNA Polymerase (1.0 unit/μL) 0.2 μL

2× PCR Buffer for KOD FX 5.0 μL

ddH₂O 1.2 μL

(3) PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94℃ 2min，98℃ 10s，60℃ 30 s，68℃ 30 s，擴(kuò)增 35個(gè)循環(huán)，最后 68℃終延伸1 min，

(4) DNA擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并通過(guò)顯色記錄擴(kuò)增的 DNA 條帶。

4.如權(quán)利要求1所述水稻耐冷主效QTL CTS12緊密連鎖的分子標(biāo)記M5在水稻耐冷CTS12的定位與克隆中的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求3所述的水稻耐冷主效QTL CTS12緊密連鎖的分子標(biāo)記M5在選育水稻耐冷品種中的應(yīng)用。