[發(fā)明專利]一種用于骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)的處理方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011572721.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN112575066A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張玉杰;程振;李永玲;王桂林;孫媛;張娟;程宇;梁超;陳忠;黃士昂;其他發(fā)明人請(qǐng)求不公開姓名
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京海思特醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6841
• 分類號(hào): C12Q1/6841;C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種用于骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)的處理方法以及制備骨髓涂片的試劑盒。其中試劑盒中主要包括：20×SSC洗液、NP40、DAPI染色液；蛋白酶；FISH檢測(cè)探針。骨髓涂片的處理方法，包括骨髓涂片、烤片、蛋白酶消化、雜交、洗脫，室溫風(fēng)干，染色等操作。采用本發(fā)明制備的骨髓涂片進(jìn)行FISH檢測(cè)，取消了常規(guī)方法中細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞收獲和細(xì)胞滴片等操作，排除標(biāo)本的交叉污染可能，提高檢測(cè)報(bào)告時(shí)效，且檢測(cè)準(zhǔn)確、具有較高的靈敏度以及精密度，樣本用量少，更有利于患者的及時(shí)診治，滿足了臨床的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)的處理方法。

背景技術(shù)

熒光原位雜交技術(shù)(fluorescent in situ hybridization)，簡(jiǎn)稱FISH，是利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號(hào)，來確定與特異探針雜交后被染色的細(xì)胞或細(xì)胞器的形態(tài)和分布，或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細(xì)胞器中的定位。目前，常用FISH技術(shù)來檢測(cè)血液腫瘤(AML、ALL、NHL、MDS、MM、NB)。常規(guī)血液腫瘤FISH檢測(cè)方法，

1)標(biāo)本量要求高：常規(guī)方法標(biāo)本量需要1～2ml/探針。如用骨髓涂片方法進(jìn)行FISH檢測(cè)，標(biāo)本量只需要20μl/探針，對(duì)于一些疾病原因?qū)е鲁槿」撬枇可儆欣粚?duì)需要做很多檢測(cè)項(xiàng)目，骨髓涂片進(jìn)行FISH檢測(cè)優(yōu)勢(shì)明顯。

2)標(biāo)本運(yùn)輸條件及時(shí)效要求高：常規(guī)方法運(yùn)輸條件溫度為2～8℃，標(biāo)本時(shí)效要求72小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。如用骨髓涂片方法進(jìn)行FISH檢測(cè)，標(biāo)本運(yùn)輸條件溫度為常溫，標(biāo)本時(shí)效可以在一周內(nèi)完成(168小時(shí))且結(jié)果不受影響。若需要長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)保持，可以進(jìn)行瑞氏染色進(jìn)行保存2年以內(nèi)有效。

3)標(biāo)本制備環(huán)節(jié)多：常規(guī)方法標(biāo)本處理流程多，如細(xì)胞收獲，細(xì)胞滴片操作過程，大批量標(biāo)本處理可能存在標(biāo)本污染的風(fēng)險(xiǎn)。如用直接對(duì)骨髓涂片進(jìn)行FISH檢測(cè)，避免了標(biāo)本處理過程中的交叉污染。

由于常規(guī)FISH方法，處理標(biāo)本流程多(白細(xì)胞計(jì)數(shù)、接種、收獲、滴片)，每個(gè)標(biāo)本流程多，在標(biāo)本制片的前期過程中可能存在樣本交叉風(fēng)險(xiǎn)，如用直接對(duì)骨髓涂片進(jìn)行FISH檢測(cè)避免標(biāo)本污染的可能性，省去常規(guī)FISH檢測(cè)的標(biāo)本處理流程，大大提高檢測(cè)報(bào)告時(shí)效。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種用于骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)的方法。

本申請(qǐng)采用直接對(duì)骨髓涂片進(jìn)行FISH檢測(cè)的方法，克服對(duì)標(biāo)本量、標(biāo)本運(yùn)輸、標(biāo)本時(shí)效高的要求，同時(shí)取消常規(guī)方法中細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞收獲和細(xì)胞滴片，避免標(biāo)本的交叉污染，提高檢測(cè)報(bào)告時(shí)效性，更有利于患者的及時(shí)診治。對(duì)于某些疾病導(dǎo)致骨髓液取量少、干抽或需要做很多檢測(cè)項(xiàng)目的患者來說，節(jié)省標(biāo)本量，擴(kuò)大檢測(cè)項(xiàng)目。對(duì)于骨穿時(shí)未送檢或未做相關(guān)疾病FISH檢測(cè)，且骨髓液標(biāo)本時(shí)效超過72小時(shí)，不能正常送檢，影響診斷和治療，這時(shí)可以采用穿刺骨髓涂片進(jìn)行補(bǔ)送，避免重復(fù)采集骨髓液，減少對(duì)患者穿刺帶來痛苦。

對(duì)部分治療后的患者，治療一段時(shí)間后，存在某些遺傳學(xué)改變，出現(xiàn)復(fù)雜異常，需要確定是否為初發(fā)時(shí)存在的復(fù)雜異常，還是疾病進(jìn)展中出現(xiàn)的附加異常，這對(duì)了解疾病的進(jìn)展非常關(guān)鍵。骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)對(duì)于初發(fā)未做遺傳學(xué)檢測(cè)的患者非常有利，可以用初發(fā)時(shí)染色形態(tài)學(xué)涂片進(jìn)行檢測(cè)，確定附加異常是否為初發(fā)還是治療相關(guān)導(dǎo)致。由于常規(guī)FISH檢測(cè)對(duì)標(biāo)本時(shí)效高，不能對(duì)這類標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)確定，骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)對(duì)標(biāo)本時(shí)效要求非常低，能再去確定這類異常是否為初發(fā)異常。

現(xiàn)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室不斷發(fā)展，技術(shù)不斷創(chuàng)新，智能化設(shè)備不斷升級(jí)，目前FISH檢測(cè)設(shè)備從以前手工，逐漸變?yōu)橹悄芑佑欣谂R床應(yīng)用，骨髓涂片F(xiàn)ISH檢測(cè)結(jié)合形態(tài)學(xué)，在通過特異性的探針，確定某些細(xì)胞是否為腫瘤細(xì)胞。

1)骨髓涂片進(jìn)行形態(tài)學(xué)染色，染色完成后，用FISH全自動(dòng)掃描儀進(jìn)行骨髓涂片全片掃描。