[發(fā)明專利]新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒全預(yù)混凍干多重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011571695.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN112760415A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李然棟;馬清霞;薄慧文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島巴特菲科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：包括凍干固態(tài)RT-PCR Mix，液態(tài)復(fù)溶Buffer、凍干固態(tài)陽(yáng)性對(duì)照、凍干固態(tài)陰性對(duì)照和病毒RNA提取試劑，所述凍干固態(tài)RT-PCR Mix含有SARS-CoV-2特異性N gene、甲型流感M基因、乙型流感M基因和人源內(nèi)參基因RNAse P引物序列對(duì)應(yīng)的引物組。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述引物組為四組引物和探針，所述引物和探針的序列如下表：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述第一組合中的引物為第1引物組，所述第1引物組用于檢測(cè)SARS-CoV-2；所述第二組合中的引物為第2引物組，所述第2引物組用于檢測(cè)甲型流感病毒；所述第三組合中的引物為第3引物組，所述第3引物組用于檢測(cè)乙型流感病毒；所述第四組合中的引物為第4引物組，所述第4引物組用于檢測(cè)內(nèi)標(biāo)基因RNaseP。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述凍干固態(tài)RT-PCR Mix在凍干前全預(yù)混混合液中含有dATP、dGTP、dCTP、dUTP、Taq DNA聚合酶、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNase抑制劑、UDG酶、N基因-F/R/P、InfA M基因-F1/F2、InfA M基因-R1、InfA M基因R2、InfA M基因P、InfB M基因-F/R/P、RNase P-F/R/P以及含3％～6％海藻糖(w/v)、0.01％～0.1％甘氨酸(w/v)、0.1％～1％牛血清白蛋白(w/v)、1mmol/L-5mmol/L DTT、0.1-0.3％Proclin 300、0.1-1％甲酰胺的凍干復(fù)合保護(hù)劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述凍干固態(tài)RT-PCRMix在凍干前的全預(yù)混液中混合液中：第1檢測(cè)組引物探針濃度分別為200nM、200nM、100nM，第2檢測(cè)組引物探針濃度分別為300nM、300nM、200nM；第3檢測(cè)組引物探針濃度分別為500nM、500nM、300nM；第4檢測(cè)組引物探針濃度分別為500nM、500nM、600nM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述液態(tài)復(fù)溶Buffer含有MgSO4、KCl、Tris-HCl、(NH4)2SO4、TritonX-100以及甜菜堿。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述凍干固態(tài)陽(yáng)性對(duì)照為體外合成的一條含有SARS-CoV-2特異性基因N、甲型流感M基因、乙型流感M基因特異片段的凍干粉狀固態(tài)RNA；所述凍干固態(tài)陰性對(duì)照為提純的非SARS-CoV-2N基因、甲型流感M基因、乙型流感M基因所對(duì)應(yīng)的凍干固態(tài)RNA。

8.權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒、甲型和乙型流感病毒的三重?zé)晒釶CR快速檢測(cè)方法，其特征在于：使用方法包括以下步驟：

(1)模版RNA提取，采用核酸提取盒提取待測(cè)樣品RNA；

(2)試劑準(zhǔn)備：向每個(gè)含有全預(yù)混凍干顆粒的PCR管中加入15μL復(fù)溶Buffer RB；

(3)加入樣品與對(duì)照：根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品數(shù)量，每管分別加入5μL提取后的樣品RNA、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照；

(4)離心并放入熒光定量PCR儀內(nèi)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(5)結(jié)果判定。