[發(fā)明專利]一種磁珠法核酸提取液及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011571423.0
• 申請日: 2020-12-27
• 公開（公告）號: CN112646802A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王旭;朱積寶
• 申請（專利權(quán)）人: 長春晨裕生物醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C08B37/08
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• 代理人: 暫無信息

1.一種磁珠法核酸提取液，其特征在于，包括改性的殼聚糖包覆的磁珠、結(jié)合液、洗滌液和洗脫液；所述改性的殼聚糖包覆的磁珠為經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖包覆的磁珠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取液，其特征在于，制備所述經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖的材料包括以下重量份的各組分：

殼聚糖8-10份、乙酸8-10份、聚合氯化鋁8-10份、氯化鈣1-3份、水800-1000份。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取液，其特征在于，所述結(jié)合液為氯化鈉和PEG6000的水溶液；

優(yōu)選地，所述結(jié)合液中氯化鈉的濃度為1.5-2.5M，PEG6000的濃度為8-12wt％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的提取液，其特征在于，所述洗滌液為乙醇水溶液，優(yōu)選為60-65v/v％的乙醇水溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的提取液，其特征在于，所述洗脫液為TE緩沖液，其中，Tris-HCl的濃度為10-15mM，EDTA的濃度為1mM，pH為8.0-8.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的提取液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，制備經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖；

S2，制備經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖包覆的磁珠。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，S1步驟中，包括以下步驟：

S11，混合水和氯化鈣，攪拌；

S12，加入混合好的殼聚糖和乙酸，攪拌；

S13，加入聚合氯化鋁，混合，攪拌，室溫吸附2-3h；

S14，噴霧干燥，得到固體粉末。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，S2步驟中，包括以下步驟：

S21，四氧化三鐵顆粒和水混合，超聲，得到混合液A；

S22，經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖、乙二醛和乙酸水溶液混合，攪拌，得到混合液B；

S23，混合液A和混合液B混合，室溫下攪拌6-8h；

S24，干燥；

其中，S21和S23在體系中通入氮?dú)猓琒24在氮?dú)鈿夥障逻M(jìn)行干燥。

9.根據(jù)權(quán)利要求7-8任一所述的方法，其特征在于，S12步驟中，制備所述經(jīng)過聚合氯化鋁改性的殼聚糖的材料中，氯化鈣的含量C通過以下公式確定：

其中，a為殼聚糖的含量，b為常數(shù)，5≤b≤12。

10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一所述的方法，其特征在于，S21步驟中，對四氧化三鐵顆粒和水混合液進(jìn)行超聲處理后的均一度進(jìn)行齊次檢驗(yàn)，判斷是否合格，包括以下步驟：

S21，四氧化三鐵顆粒和水混合，超聲處理3-5min；重復(fù)一次；

S22，分別用向量X1和X2表示超聲處理一次和超聲處理兩次的混合液均一度；

S23，用下列公式計(jì)算向量的穩(wěn)定度：

向量X1的穩(wěn)定度為

向量X2的穩(wěn)定度為

其中，

S24，如果大于3.02，則判定混合液的均一度不合格，繼續(xù)重復(fù)超聲一次，直至合格。