[發(fā)明專利]一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒

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• 申請日: 2020-12-27
• 公開（公告）號: CN112695080A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設計）人: 王志;羅景燕;何繼謙;鄭耿鴻;周加鑫
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院;廣東永諾醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州長星專利商標代理事務所(普通合伙) 44662
• 代理人: 梁桂萍

1.一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒主要包括PCR反應液、檢測引物、反轉錄緩沖液、反轉錄引物和陽性對照品。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述的反轉錄引物為：以SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列為反轉錄引物Pri-RT。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述的檢測引物為：以SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列為上游引物Pri-F1；以SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列為下游引物Pri-R1。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括PCR反應預混液、上游引物Pri-F1、下游引物Pri-R1、無核酸酶水。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述反轉錄緩沖液包括dNTPs、5X Buffer、反轉錄引物、無核酸酶水。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為合成的miRNA-106b雙鏈mimics。

7.根據(jù)權利要求2所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述反轉錄引物Pri-RT的濃度為1ug/μl。

8.根據(jù)權利要求3所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒，其特征在于，所述上游引物Pri-F1、下游引物Pri-R1的濃度為200nM。

9.根據(jù)權利要求1～8任一項所述的一種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒的應用方法，其特征在于，所述的應用方法包括以下步驟：

1)提取miRNA模板；

2)配制反轉錄緩沖液；

3)進行反轉錄，得到cDNA模板；

4)配制PCR反應液；

5)配制PCR特異擴增反應體系；

6)將PCR特異擴增反應體系生成微滴；

7)進行數(shù)字PCR擴增，并通過軟件得到拷貝數(shù)。

10.根據(jù)權利要求9所述的種基于數(shù)字PCR平臺的miRNA-106b檢測試劑盒的應用方法，其特征在于，所述步驟2)中配制反轉錄緩沖液的組分為：10mM dNTPs、5X Buffer、1ug/μl反轉錄引物、反轉錄酶、無核酸酶水；步驟4)中配制PCR反應液的組分為：PCR反應預混液、10μM上游引物、10μM下游引物、核酸酶水、cDNA模板。