[發明專利]一種重組人糖皮質激素受體GRα-His蛋白及其表達和純化方法在審
| 申請號： | 202011568864.5 | 申請日： | 2020-12-25 |
| 公開（公告）號： | CN112695052A | 公開（公告）日： | 2021-04-23 |
| 發明（設計）人： | 沈玉棟;李虹輝;楊金易;王弘;徐振林;孫遠明 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12P21/02;C07K19/00;C07K1/22;C07K1/34;C07K1/36 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 重組 糖皮質激素 受體 gr his 蛋白 及其 表達 純化 方法 | ||
1.一種重組人糖皮質激素受體GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.將含有人糖皮質激素受體GRα基因的重組表達載體質粒轉化到宿主菌，獲得重組菌株；
S2.對重組菌株進行誘導，表達GRα-His蛋白；
S3.采用鎳離子親和層析柱對步驟S2表達的蛋白進行純化，用平衡緩沖液平衡層析柱，用洗脫緩沖液進行洗脫，收集洗脫液，得GRα-His蛋白溶液；
S4.將步驟S3所得的蛋白溶液加入到透析緩沖液中進行透析，即得純化的GRα-His蛋白。
2.根據權利要求1所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，步驟S2所述誘導的方法為采用誘導劑IPTG進行誘導。
3.根據權利要求2所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，所述誘導的方法為：在含氨芐青霉素的LB培養基中37℃培養至OD600nm為0.4～0.6后，加入終濃度為0.2～0.6mM的IPTG進行誘導。
4.根據權利要求3所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，所述IPTG的終濃度為0.2mM。
5.根據權利要求3所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，所述誘導的條件為：在18℃條件下誘導表達24h。
6.根據權利要求1所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，步驟S3所述平衡緩沖液含有濃度為15～20mmol/L的Tris-HCl緩沖液、250～300mmol/L的NaCl，pH為7.8～8.0。
7.根據權利要求1所述GRα-His的表達和純化方法，其特征在于，步驟S3所述洗脫緩沖液含有濃度為15～20mmol/L的Tris-HCl緩沖液、250～300mmol/L的NaCl、200～250mmol/L的咪唑，pH為7.8～8.0。
8.根據權利要求1所述GRα-His蛋白的表達和純化方法，其特征在于，步驟S4所述透析緩沖液含有濃度為15～20mmol/L的Tris-HCl緩沖液、250～300mmol/L的NaCl、0.5～1mmol/L的二硫蘇糖醇、體積濃度為8～10％的丙三醇，pH為8.0～8.5。
9.權利要求1～8任一所述GRα-His蛋白的表達和純化方法所制備的GRα-His蛋白。
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