[發明專利]一種重齒當歸ISSR-PCR分子標記及其應用

在審

• 申請號: 202011563902.8
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112553364A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 羅倩;段媛媛;郭杰;郭曉亮
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院中藥材研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開一種重齒當歸ISSR?PCR分子標記及其應用，屬于分子標記技術領域。通過對UBC81、UBC807、UBC810、UBC816、UBC817、UBC819引物的反應體系進行優化，可快速準確擴增出目的條帶，此體反應系準確可靠、操簡單、節約時間和成本及擴增條帶清晰穩定。

技術領域

本發明屬于分子標記技術領域，具體涉及一種重齒當歸ISSR-PCR分子標記及其應用。

背景技術

重齒當歸是傘形科當歸屬多年生草本藥用植物，具祛風除濕、通痹止痛之功效，是我國傳統中藥材之一。重齒當歸在湖北、重慶、甘肅、陜西均有人工種植。目前。關于重齒當歸的研究主要集中在其活性成分、臨床療效、栽培技術等方面，而缺乏關于其分子標記的研究。

分子標記技術能從DNA水平上反映物種的遺傳差異，是研究遺傳多樣性的有效方法。近年來，ISSR分子標記技術因其操作簡單、多態性高、重復性好等優點被廣泛應用于動植物的品種鑒定等。但ISSR標記是一種隨機性標記方法，不同物種甚至同一物種不同條件下其試驗參數均有差異，因此建立一個科學合理的ISSR-PCR反應體系，探尋最佳的PCR各組分的用量，可為后續開展重齒當歸的遺傳多樣性研究及良種選育等工作提供理論依據。

因此，如何提供一種重齒當歸ISSR-PCR分子標記及其應用是本領域亟待解決的問題。

發明內容

本發明針對現有針對重齒當歸的研究缺乏關于其分子標記研究的問題，提供了一種重齒當歸ISSR-PCR分子標記及其應用。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種重齒當歸ISSR-PCR引物，序列如下：

UBC812：GAGAGAGAGAGAGAGAA，SEQ ID NO.1；

UBC807：AGAGAGAGAGAGAGAGT，SEQ ID NO.2；

UBC810：GAGAGAGAGAGAGAGAT，SEQ ID NO.3；

UBC816：CACACACACACACACAT，SEQ ID NO.4；

UBC817：CACACACACACACACAA，SEQ ID NO.5；

UBC819：GTGTGTGTGTGTGTGTA，SEQ ID NO.6；

反應體系為20μL，其中含有2×TaqMasterMix 9.8μL，模板DNA 9.04ng，引物0.325μM，其余為H₂O；

優選的，使用的試劑盒為北京天恩澤基因科技有限公司，天凈沙系列，即用型PCR試劑盒3.0；

擴增程序為：94℃預變性4min；94℃變性1min；53.9℃退火40s；72℃延伸40s，循環40次；72℃延伸5min，最后保存于4℃；

一種重齒當歸ISSR-PCR的鑒定方法，其特征在于，步驟如下：

1)采集重齒當歸的嫩葉，提取植物組DNA；

2)采用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA；

3)采用上述ISSR-PCR引物，通過上述ISSR-PCR反應體系對步驟1)提取的DNA樣品進行擴增。

綜上所述，本發明提供了一種重齒當歸ISSR-PCR分子標記及其應用。與現有技術相比，本發明可以獲得包括以下技術效果：

本發明通過6種重齒當歸的ISSR-PCR分子標記用引物進行優化，建立并優化了重齒當歸的ISSR-PCR分子標記反應體系，該方法準確可靠、操作簡單、節約時間和成本，擴增條帶清晰穩定，易于快速分析檢測。