[發(fā)明專利]一種吡咯并喹啉醌二鈉鹽的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011563897.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN112500407B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳丹;張赪;賈曉妮;劉瓊;寇曉康
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司;高陵藍(lán)曉科技新材料有限公司
• 主分類號(hào): C07D471/04
• 分類號(hào): C07D471/04
• 代理公司: 北京三聚陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 李紅團(tuán)

本發(fā)明公開了一種吡咯并喹啉醌二鈉鹽的純化方法，首先將吡咯并喹啉醌二鈉鹽溶解在含有表面活性劑的緩沖鹽溶液中，使用以反相聚合物微球?yàn)樘盍系纳V柱進(jìn)行色譜分離；得到純化后的吡咯并喹啉醌鹽溶液，再經(jīng)過濃縮、結(jié)晶、干燥的過程得到吡咯并喹啉醌二鈉鹽。本純化方法純化得到的吡咯并喹啉醌二鈉鹽純度高，單雜≤0.1％，收率高；純化用的樹脂吸附量大，壽命長(zhǎng)，可以重復(fù)利用，適用于規(guī)模化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物純化領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及涉及一種高純度吡咯并喹啉醌二鈉鹽的純化方法。

背景技術(shù)

吡咯并喹啉醌(PQQ)二鈉鹽(以下簡(jiǎn)單稱為：“PQQ”)，化學(xué)名：4,5-二氧代-4,5-二氫-1H-吡咯并[2，3-F]喹啉-2,3,9-三羧酸二鈉鹽。是一種新型水溶性維生素，是一種氧化還原酶輔基，對(duì)微生物和動(dòng)植物均具有重要的生理作用：可以提高人體的免疫力，減少自由基對(duì)人體的傷害，調(diào)理各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病，促進(jìn)氨基酸的吸收，促進(jìn)合成生長(zhǎng)因子，防止老年癡呆癥，促進(jìn)合成谷胱甘肽等。其結(jié)構(gòu)如下圖所示：

目前主要通過發(fā)酵方法和化學(xué)合成方法來取得吡咯并喹啉醌(PQQ)二鈉鹽，本純化方法主要針對(duì)：化學(xué)合成法或者發(fā)酵法生產(chǎn)的，經(jīng)過離心、萃取、沉淀、結(jié)晶等過程后含量為90-97％的吡咯并喹啉醌鹽。

由于PQQ結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，普通的有機(jī)溶劑體系很難將其與雜質(zhì)分離，專利和文獻(xiàn)中報(bào)道PQQ純化很少。專利CN201510843823.5報(bào)道了一種吡咯并喹啉醌PQQ二鈉鹽雜質(zhì)的純化方法，用5微米的GP C18填料，柱壓約12MPa，樣品純度＞95％，載量小于0.2％。這個(gè)專利的純化過程存在柱層析載量低、柱壓高造成生產(chǎn)成本高的問題。并且FDA要求單雜不超過0.1％。因此，提供一種載量高、自動(dòng)化水平高、生產(chǎn)成本低的高純度吡咯并喹啉醌PQQ二鈉鹽純化方法，是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種高純度吡咯并喹啉醌PQQ二鈉鹽的純化方法，用反相層析純化即可得到符合FDA要求的吡咯并喹啉醌PQQ二鈉鹽。

本發(fā)明所提供的高純度吡咯并喹啉醌二鈉鹽的純化方法，主要是反相層析進(jìn)行分離純化，然后經(jīng)過濃縮、結(jié)晶、干燥得到高純度吡咯并喹啉醌二鈉鹽。

具體地，反相層析以聚合物反相填料作為色譜柱的固定相，包含以下步驟：

(A)配制流動(dòng)相A、B、C：

流動(dòng)相A：含有0.1-2.0％(W/V)表面活性劑的緩沖鹽溶液，緩沖溶液pH3-6；

流動(dòng)相B：含有10-50％(V/V)有機(jī)溶劑-流動(dòng)相A溶液，

流動(dòng)相C：含有50-100％(V/V)有機(jī)溶劑-水溶液；

(B)溶解PQQ二鈉鹽：用流動(dòng)相A溶解吡咯并喹啉醌(PQQ)二鈉鹽，加酸調(diào)節(jié)至pH3-6，溶解后PQQ的濃度為0.5-5mg/ml；

(C)裝填色譜柱：聚合物反相填料用0-60％(V/V)的醇-水溶液濕法裝柱，裝柱壓力0.5-20MPa，裝柱高度大于25cm。

(D)柱平衡：用流動(dòng)相A對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡4-6CV對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡，平衡過程線流速不高于10cm/min。

(E)上樣：將吡咯并喹啉醌粗品溶解于平衡液中，用酸調(diào)節(jié)至pH 3.0-6.0，溶解后濃度為0.5-5mg/mL，上樣至色譜柱，載量20-80g/L，過程線流速不高于10cm/min；上樣過程出現(xiàn)目標(biāo)物流穿后開始收集；

(F)洗脫：使用4-10CV的流動(dòng)相B對(duì)吸附在色譜柱上吡咯并喹啉醌進(jìn)行洗脫，洗脫過程線流速不高于10cm/min，合并收集洗脫液，為純化后吡咯并喹啉醌鹽溶液；