[發(fā)明專利]一種他克莫司發(fā)酵液固液分離方法

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• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112694486A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉永勝;胡寧;劉小艷;李艷琴
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州營力醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18;B01D15/00
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明屬于提純技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種他克莫司發(fā)酵液固液分離方法，步驟包括：(1)樹脂吸附，(2)離心分離，(3)樹脂洗脫。本方法先利用密度差異將菌絲體與大孔吸附樹脂離心分離，節(jié)省了浸提需要的溶劑，浸提液質(zhì)量高，色素少，不僅更加經(jīng)濟(jì)，而且降低了環(huán)保壓力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及提純技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種他克莫司發(fā)酵液固液分離方法。

背景技術(shù)

他克莫司(tacrolimus,FK506)是由日本藤澤藥品工業(yè)公司在1984年自日本筑波山土壤中分離的筑波鏈霉菌(streptomyces tsukubaensis)No.9993的發(fā)酵液中提取得到的一種新型二十三元大環(huán)內(nèi)酯聚酮免疫抑制劑。臨床研究表明，其免疫抑制活性是傳統(tǒng)免疫劑環(huán)孢素A的10～100倍。目前已廣泛應(yīng)用于肝臟、骨髓移植，對其它藥物耐藥腎移植的排斥防治，白塞氏病、變性性皮炎、銀屑病、魚鱗病、斑禿、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮蘚，多發(fā)性硬化病、糖尿病等多種自身免疫疾病的治療。自在中國上市的短短時間內(nèi)，市場份額迅速上升，已成為肝臟及腎移植后排斥反應(yīng)的臨床一線藥物。

他克莫司是由發(fā)酵產(chǎn)生的，所以在發(fā)酵液存在很多副產(chǎn)物，需要進(jìn)一步提純來分離他克莫司。發(fā)酵液中存在的成分需要先進(jìn)行固液分離，以往的工藝步驟是：

步驟(1)：發(fā)酵培養(yǎng)48小時時向發(fā)酵液中補(bǔ)入發(fā)酵液體積3％的大孔吸附樹脂，在培養(yǎng)過程中菌絲體次級代謝產(chǎn)生的他克莫司被大孔吸附樹脂吸附，發(fā)酵放罐單位比不加樹脂提高20％以上。

步驟(2)：發(fā)酵結(jié)束后用板框壓濾機(jī)對發(fā)酵液固液分離，同時收集到菌絲體和吸附樹脂，經(jīng)HPLC檢測后發(fā)現(xiàn)菌絲體內(nèi)的他克莫司的含量為0，所有發(fā)酵過程中產(chǎn)生的他克莫司均被樹脂吸附。

步驟(3)：用5倍量的甲醇溶液對菌絲體和吸附樹脂浸提。

這個工藝的缺點(diǎn)在于用板框壓濾機(jī)壓濾他克莫司發(fā)酵液會同時收集到菌絲體和大孔吸附樹脂，因兩者無法有效的分離，所以雖然菌絲體內(nèi)是不含他克莫司的，浸提時仍然需要對菌絲體和大孔吸附樹脂同時浸提，所以浸提過程溶劑消耗量大，浸提出的雜質(zhì)也更多，大量的溶劑后處理也對環(huán)境產(chǎn)生了很大的壓力。

因此有必要開發(fā)一種新的提純工藝來解決以上問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于提供一種他克莫司發(fā)酵液固液分離方法，能夠減少浸提所需溶劑，提升浸提液質(zhì)量，減少環(huán)保壓力。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：一種他克莫司發(fā)酵液固液分離方法，步驟包括：

(1)樹脂吸附：在發(fā)酵液中補(bǔ)入發(fā)酵液體積3％的大孔吸附樹脂攪拌至完全吸附；

(2)離心分離：通過高速管式離心機(jī)對發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，讓吸附了他克莫司的大孔吸附樹脂處于離心管的下部，取出大孔吸附樹脂；

(3)樹脂洗脫：將大孔吸附樹脂先用第一洗脫劑洗脫色素，然后再用第二洗脫劑洗脫他克莫司，得到他克莫司浸提液。

具體的，所述步驟(3)中的第一洗脫劑為50％體積含量的甲醇溶液。

進(jìn)一步的，所述第一洗脫劑的用量為5倍樹脂體積。

具體的，所述步驟(3)中的第二洗脫劑為75％體積含量的甲醇溶液。

進(jìn)一步的，所述第二洗脫劑的用量為5倍樹脂體積。

采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明技術(shù)方案的有益效果是：

本方法先利用密度差異將菌絲體與大孔吸附樹脂離心分離，節(jié)省了浸提需要的溶劑，浸提液質(zhì)量高，色素少，不僅更加經(jīng)濟(jì)，而且降低了環(huán)保壓力。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實(shí)施例：