[發(fā)明專利]基因傳遞載體、含該基因傳遞載體的基因傳遞系統(tǒng)及其藥物組合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011563631.6
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112641952A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田華雨;方華攀;陳杰;林琳;郭兆培;胡瑩瑩;陳學(xué)思
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類號: A61K47/59
• 分類號: A61K47/59;A61K47/60;A61K47/69;A61K31/7088;A61K45/06;A61P35/00;A61P35/04;C12N15/87
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及基因傳遞載體、含該基因傳遞載體的基因傳遞系統(tǒng)及其藥物組合物。本發(fā)明提供的基因傳遞載體由內(nèi)核和包裹在所述內(nèi)核外的遮蔽層組成；內(nèi)核為聚酰胺?胺、殼聚糖、聚賴氨酸或聚乙烯亞胺中的任意一種接枝甲苯磺酰基精氨酸得到的陽離子聚合物；遮蔽層為聚乙二醇和聚谷氨酸的共聚物。實驗表明，本發(fā)明所述載體能夠在細胞水平以及體內(nèi)獲得顯著的轉(zhuǎn)染效率，同時具有顯著的沉默效率。利用該基因載體介導(dǎo)的免疫檢查點基因或免疫檢查點配體基因的shRNA聯(lián)合表觀遺傳學(xué)藥物獲得的藥物組合物具有顯著的抗腫瘤效果且能夠有效抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及基因傳遞載體、含該基因傳遞載體的基因傳遞系統(tǒng)及其藥物組合物。

背景技術(shù)

免疫治療已經(jīng)作為癌癥治療的強有力的工具。然而臨床上只有少部分患者能夠持久獲益。這主要是因為腫瘤存在免疫逃避機制。其中一個原因是腫瘤相關(guān)抗原不足以及抗原提呈細胞呈遞抗原給T細胞的能力不足，從而導(dǎo)致差的T淋巴細胞響應(yīng)。另外一個原因是T細胞存在免疫檢查點抑制依賴的免疫抑制，如在T細胞表面表達的程序性死亡(PD-1)受體與腫瘤細胞表面表達的程序性死亡配體1(PD-L1)和配體2(PD-L2)結(jié)合，導(dǎo)致T細胞不能發(fā)揮效應(yīng)功能。

一般地，腫瘤細胞碎片能夠作為腫瘤抗原，通常的手段包括光熱治療(PTT)，光動力治療(PDT)以及化療藥物介導(dǎo)的免疫原性細胞死亡(ICD)。然而，光熱和光動力治療受限于光熱試劑，光敏劑以及光源。此外，化療藥物通常對正常組織造成嚴重的毒副作用。因此急需一種高效安全的策略來促發(fā)抗原特異性的免疫響應(yīng)。最近有文獻報道表觀遺傳學(xué)調(diào)控比如DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑(DNMTi)不僅能夠上調(diào)腫瘤抗原的表達，而且也會誘導(dǎo)腫瘤細胞表面的I型主要組織相容性復(fù)合體(MHCI)的表達，提高抗原提呈細胞的呈遞抗原效率，增強腫瘤細胞對免疫系統(tǒng)的可視性。

此外，免疫檢查點是關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)通路，能夠使得T細胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷失效。其中T細胞表面的PD-1往往會與腫瘤細胞表面的PD-L1或PD-L2結(jié)合，導(dǎo)致T細胞耗竭。許多靶向PD-1或PD-L1的單克隆抗體對于一些腫瘤具有效果，包括黑色素瘤，肝癌，非小細胞肺癌等。然而，僅僅只有小部分患者有效果且重復(fù)給藥也會造成耐藥性。此外，PD-1或PD-L1抗體也會造成嚴重的副作用比如免疫不良響應(yīng)。因此，急需提供一種可替代的策略逆轉(zhuǎn)T細胞耗竭同時也能避免抗體產(chǎn)生的副作用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了基因傳遞載體、含該基因傳遞載體的基因傳遞系統(tǒng)及其藥物組合物。本發(fā)明基因傳遞載體能夠在細胞水平以及體內(nèi)獲得顯著的轉(zhuǎn)染效率，利用基因傳遞載體介導(dǎo)的免疫檢查點基因或免疫檢查點配體基因的shRNA聯(lián)合表觀遺傳學(xué)藥物獲得的藥物組合物具有顯著的抗腫瘤效果且能夠有效抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供的基因傳遞載體，由內(nèi)核和包裹在所述內(nèi)核外的遮蔽層組成；所述

一些實施方案中，所述內(nèi)核為聚乙烯亞胺接枝甲苯磺酰基精氨酸得到的陽離子聚合物。

本發(fā)明中，陽離子聚合物的作用在于擔載基因物質(zhì)。一些實施方案中，聚乙烯亞胺的分子量為600-25000，一些具體實施例中聚乙烯亞胺的分子量為1800。一些實施方案中，所述聚乙烯亞胺為線性聚乙烯亞胺或超支化聚乙烯亞胺。

一些實施方案中，所述甲苯磺酰基精氨酸的接枝數(shù)目為1～500，即聚乙烯亞胺與甲苯磺酰基精氨酸的摩爾比為1:1～500。一些優(yōu)選實施方案中，聚乙烯亞胺與甲苯磺酰基精氨酸的摩爾比為1:4～12。一些具體實施例中，聚乙烯亞胺與甲苯磺酰基精氨酸的摩爾比為1:4、1:6、1:8、1:10或1:12。

本發(fā)明中，所述遮蔽層為聚乙二醇和聚谷氨酸的共聚物。其中，聚乙二醇和聚谷氨酸按照摩爾比為1:10～200的比例發(fā)生共聚反應(yīng)。一些具體實施例中，聚乙二醇和聚谷氨酸的摩爾比為1:10或1:200。