[發明專利]檢測血清LUM表達的肝病纖維化檢測試劑、檢測試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 202011563336.0
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112763716A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 施軍平;楊勁;陸安倩
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學附屬醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了LUM作為一種新的診斷肝病纖維化的生物標記物，提供了檢測血清LUM表達的肝病纖維化檢測試劑、檢測試劑盒和檢測方法及應用，包括LUM捕獲抗體和用于標記的LUM檢測抗體。本發明對于肝病重癥化的早期預警和診斷具有重要的轉化價值。同時，還建立了一種基于雙抗體夾心原理的酶聯免疫診斷試劑，可以快速準確地進行LUM定量檢測，以對各類肝病的纖維化程度作出快速的輔助診斷。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域。更具體地，涉及一種用于肝病纖維化診斷的雙抗體夾心法ELISA檢測試劑及方法。

背景技術

肝病是指各種原因導致肝臟疾病的統稱，按病因分類可分為酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、病毒性肝病、自身免疫性肝病、藥物/毒物性肝病、膽汁淤積性肝炎及遺傳性肝病等。肝病的自然史中，肝病重癥化傾向常以肝病的纖維化為表征，肝病纖維化晚期可發展至肝硬化甚至肝癌。當前對終末期肝病的治療并不樂觀，早期診斷、干預對肝病的治療及預后至關重要。

目前，肝組織病理活檢仍是評價肝病程度的金標準，但屬于有創性方法。肝纖維化四項如血清III型前膠原氨基端肽(PIIINP)、IV膠原(CIV)、層連蛋白(LN)、透明質酸(HA)已在臨床開展，但存在特異性、敏感性不足的缺陷。影像學技術可用于診斷肝硬化、肝腫瘤，但對慢性肝病存在早期預警程度差、成本較高的缺點。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有肝病預后診斷技術的缺陷和不足，提供了一種新的肝病纖維化診斷標志物，即基膜聚糖(Lumican,LUM)。LUM是一種蛋白聚糖，隸屬于富含亮氨酸低分子蛋白聚糖家族，最早在牛角膜基質中發現，其基因定位于染色體12q21.3-q22。作為細胞外基質的重要成分，LUM主要參與維持組織的結構穩態。

各類肝病中，肝臟纖維化程度是病情進展的一種指征；當纖維化進展成4期即肝硬化時，病情基本成不可逆性表現。本發明研究發現，血清LUM水平是肝病病情的檢測指標，可以作為肝病臨床輔助診斷手段，特別是對于肝病纖維化的顯著期/進展期的發病預警和早期診斷，具有重要的臨床應用價值。

本發明的第一個目的是提供血清LUM在作為肝病纖維化診斷標志物方面的應用。

本發明第二個目的是提供了一種檢測LUM表達的肝病纖維化檢測試劑盒，包括LUM捕獲抗體和用于標記的LUM檢測抗體。

具體的，LUM捕獲抗體用于包被酶標板，辣根過氧化物酶標記于LUM檢測抗體。

更為具體的，所述試劑盒包括LUM捕獲抗體包被的酶標板、辣根過氧化物酶(HRP)標記的LUM檢測抗體、LUM標準品、和輔助試劑組成。

更具體的，所述試劑盒包括如下組分：(1)酶標板：在固相96孔酶標板上包被有人LUM重組單克隆抗體；(2)酶結合物工作液：辣根過氧化物酶標記的人LUM重組單克隆抗體反應液；(3)顯色液；(4)洗滌液；(5)結合物稀釋液；(6)終止液。

優選地，所述試劑盒可作為肝病診斷試劑盒和早期預警診斷試劑盒。

本發明的第三個目的是提供了診斷肝病纖維化的檢測試劑，包括與LUM特異性結合的抗體。

具體的，所述抗體包括LUM捕獲抗體和用于標記的LUM檢測抗體。

所述包被酶標板的LUM捕獲抗體和HRP標記的LUM檢測抗體為配對抗體

本發明還提供了一種血清LUM的雙抗體夾心法ELISA檢測方法，利用上述試劑盒進行雙抗體夾心法ELISA檢測。

優選地，所述的血清LUM的雙抗體夾心法ELISA檢測方法步驟如下：