[發明專利]一種用于銀龍魚性別鑒定的SNP分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202011561775.8
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN114686595B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 牟希東;劉奕;劉超;楊葉欣;宋紅梅;汪學杰;徐猛;顧黨恩;房苗;胡隱昌
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446
• 代理人: 林偉斌

本發明公開了一種用于銀龍魚性別鑒定的SNP分子標記及其應用，堿基序列為：SEQ?ID?NO.1，長度為373bp；所述SNP分子標記為SEQ?ID?NO.1中第271位。通過基因組高通量測序對比以獲取銀龍魚雌雄個體之間存在差異且能表征雌雄性別的單核苷酸多肽性位點(SNP)，并結合引物擴增以獲得包含SNP位點的擴增序列，在此基礎上，通過引物實現待測樣本的PCR擴增和測序，獲得樣本SNP位點信息，從而鑒別待測樣本的性別。利用本發明的SNP位點，能在不剖解銀龍魚的前提下實現準確、快速的性別鑒定，且當該SNP位點應用于銀龍魚養殖時，便于實現成熟的人工養殖銀龍魚技術，以實現大量生產。

技術領域

本發明涉及魚類性別鑒定技術領域，更具體地，涉及一種用于銀龍魚性別鑒定的SNP分子標記及其應用。

背景技術

銀龍魚又稱雙須骨舌魚，是一種古老的“活化石”魚類，作為名貴的觀賞魚具有十分重要的經濟價值。目前，國內絕大多數的銀龍魚都是依賴進口，銀龍魚難以實現本土的大量養殖；因為目前銀龍魚繁殖技術受限，難以實現人工大量養殖。而限制繁殖技術的主要原因就體現于銀龍魚雌雄性別區分上的困難。

銀龍魚不具有兩性特異性特征，在外部形態上不能區分，即使是在生殖季節，雌雄性魚的特征也不明顯。而且由于銀龍魚具有堅硬厚實的鱗片，通過B超，CT等手段也無法穿透鱗片而判定性別。目前，只能通過解剖觀測性腺進行鑒定，無法實現簡單、準確而又不需解剖即能鑒定的方法。正是由于沒有準確判定性別的手段，才對該魚的人工繁殖造成了很大的困擾；因為性別難以區分，大多數養殖場只能采用半自然的方法進行繁殖，而不能采用較高效可控的人工繁殖方式，例如雌雄魚分塘暫養，注射催情劑和催產劑等，大大限制了繁殖效率和成功率。為了打破我國銀龍魚全部依賴進口的局面，銀龍魚的人工繁殖就成了急需解決的問題。

所以，亟需一種有效的銀龍魚性別鑒定方法或標記以區分銀龍魚雌雄性別，從而克服上述問題。

發明內容

本發明旨在克服上述現有技術的至少一種不足，提供一種用于銀龍魚性別鑒定的SNP分子標記及其應用，通過本發明的SNP位點能夠在不剖解銀龍魚的前提下實現準確、快速的性別鑒定，從而不影響銀龍魚的正常生長、繁殖，當該SNP位點應用于銀龍魚的養殖時，便于提供性別鑒定而促進養殖技術的成熟和發展，提高繁殖率和成功率。

本發明提供了一種用于銀龍魚性別鑒定的SNP分子標記，堿基序列為：SEQ?IDNO.1，長度為373bp；所述SNP分子標記為SEQ?ID?NO.1中第271位。

進一步地，當第271位堿基為A/G雜合時，樣品為雄性，為A/A純合時，樣品為雌性。SEQ?ID?NO.1僅為展示上述變化之一的代表性序列，對應其他包含上述變化的序列也應被保護。

本發明還提供一種用于鑒定或輔助鑒定銀龍魚性別的引物對，包括上游引物F和下游引物?R，所述上游引物F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述下游引物R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

本發明還提供一種用于鑒定或輔助鑒定銀龍魚性別的試劑盒，含有上述的引物對、dNTP?以及DNA聚合酶。

本發明還提供一種銀龍魚性別鑒定方法，包括以下步驟：

(1)提取待測銀龍魚的基因組DNA；

(2)以待測銀龍魚的基因組DNA為模板，利用上游引物F和下游引物R，進行PCR?擴增反應；

(3)反應完成后進行分析，確定樣品基因型，鑒定性別。

該方法能在不剖解的前提下實現銀龍魚的鑒別，且借助于包括本發明的多種測序方法或測序平臺能夠實現批量的測序，在此基礎上，更有利于應用至銀龍魚的養殖、研究上，從而快速區分銀龍魚的性別，提高鑒別、養殖效率。該鑒定方法不僅快速、簡單，且在本發明的一個以上實施例中也有所表明，鑒定結果準確。