[發明專利]滿足產品放行要求的免疫調節干細胞IDO1活性檢測方法

在審

• 申請號: 202011561297.0
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112748080A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 張愚;甘一迪;羅艷超;葉陽苗;徐然然;王淑艷
• 申請（專利權）人: 北京澤輝辰星生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78;G01N33/15
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

1.一種檢測供試品是否滿足產品放行要求的方法，所述方法包括：

用含有干擾素γ即IFN-γ和不含IFN-γ的培養基分別培養待檢測的供試品以刺激供試品；

收集培養上清，并使所收集的上清發生顯色反應；以及

測量顯色結果以獲得吲哚胺2,3-雙加氧酶1即IDO1活性，從而獲得供試品產生的L-犬尿氨酸的量，

其中所述方法還包括檢測同質參考品細胞的IDO1活性以獲得同質參考品細胞產生的L-犬尿氨酸的量，

其中如果供試品相對于同質參考品細胞的相對生物學活性≥60％，則判定所述供試品符合產品放行要求。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述供試品包含間充質干細胞，任選地所述間充質干細胞選自骨髓間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、臍帶間充質干細胞、牙髓間充質干細胞、人胚干細胞分化的間充質樣干細胞、人誘導多能干細胞分化的間充質樣干細胞中的一種或多種。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述同質參考品細胞由人胚干細胞定向分化得到，任選地，所述同質參考品細胞分化后經歷5-15次傳代。

4.根據前述任一項權利要求所述的方法，其中依下式計算供試品相對生物學活性：

供試品相對生物學活性＝(IFN-γ刺激的供試品產生的L-犬尿氨酸的量-未刺激的供試品產生的L-犬尿氨酸的量)/(IFN-γ刺激的同質參考品細胞產生的L-犬尿氨酸的量-未刺激的同質參考品細胞產生的L-犬尿氨酸的量)×100％。

5.根據前述任一項權利要求所述的方法，其中根據L-犬尿氨酸的標準曲線計算產生的L-犬尿氨酸的量，并且其中L-犬尿氨酸標準品的濃度為從500μmol/L開始按照倍比稀釋的方式連續稀釋的梯度。

6.根據前述任一項權利要求所述的方法，其中細胞接種密度為2.5×10⁴個/孔至2.5×10⁵個/孔，優選1×10⁵個/孔，IFN-γ濃度為10-1000ng/ml，優選200ng/ml，刺激時間為24-48h，優選48h；

任選地，其中取上清與PDAB反應，優選與現用現配的PDAB反應；

任選地，其中上清無需稀釋；

任選地，其中對不同廠家的IFN-γ進行篩選，以篩選出合適廠家的IFN-γ用于刺激供試品。

7.一種同質參考品細胞，其由人胚干細胞定向分化得到，任選地，其分化后經歷5-15次傳代得到。

8.一種試劑盒，其包括根據權利要求7所述的同質參考品細胞以及用于執行根據權利要求1-6中任一項所述的方法的說明書。

9.根據權利要求7所述的同質參考品細胞在制備試劑盒中的用途，其中所述試劑盒用于檢測供試品是否滿足產品放行要求。

10.根據權利要求7所述的同質參考品細胞在制備試劑盒中的用途，其中所述試劑盒用于具有類似于間充質干細胞免疫調控特性的干細胞的體外效力檢測、成藥性評價、產品放行和表征。