[發明專利]一種左乙拉西坦衍生物、免疫原、抗左乙拉西坦特異性抗體及其制備方法與應用

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• 申請號: 202011561250.4
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN114685342A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 張小可;王惠敏;鄭磊;韋志
• 申請（專利權）人: 長沙博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07D207/27
• 分類號: C07D207/27;C07K14/77;C07K16/44;C07K16/06;G01N33/546;G01N33/543;G01N33/535
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1.一種左乙拉西坦衍生物，其特征在于，其結構式如式Ⅰ所示：

式Ⅰ。

2.一種如權利要求1所述的左乙拉西坦衍生物的合成方法，其特征在于，所述合成方法如下式所示：

。

3.一種左乙拉西坦免疫原，其特征在于，所述左乙拉西坦免疫原由權利要求1所述的左乙拉西坦衍生物與載體蛋白連接而成，其結構式如式Ⅱ所示：

式Ⅱ；

其中，載體蛋白為重組鴨卵清白蛋白。

4. 根據權利要求3所述的左乙拉西坦免疫原，其特征在于，所述重組鴨卵清白蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

5.一種如權利要求3-4任一項所述的左乙拉西坦免疫原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

（B1）載體蛋白溶液的制備：將權利要求3-4任一項中所述的重組鴨卵清白蛋白溶解于磷酸鹽緩沖液中，得到載體蛋白溶液；

（B2）左乙拉西坦衍生物溶液的制備：將權利要求1所述的左乙拉西坦衍生物與二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸鉀緩沖液、1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺混合，攪拌溶解，得到左乙拉西坦衍生物溶液；

（B3）左乙拉西坦免疫原的合成：將步驟（B2）得到的左乙拉西坦衍生物溶液加入到步驟（B1）得到的載體蛋白溶液中，攪拌反應，經透析純化，得到左乙拉西坦免疫原。

6.一種抗左乙拉西坦特異性抗體，其特征在于，所述抗左乙拉西坦特異性抗體為使用權利要求3-4任一項所述的左乙拉西坦免疫原對實驗動物進行注射后所得到的特異性抗體，所述的實驗動物為兔子、山羊、綿羊、小鼠、大鼠、豚鼠或馬中的一種。

7.一種如權利要求6所述的抗左乙拉西坦特異性抗體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包含以下步驟：

（C1）將權利要求3-4任一項所述的左乙拉西坦免疫原用磷酸鹽緩沖液稀釋，得到左乙拉西坦人工抗原溶液，然后將左乙拉西坦人工抗原溶液與等量弗氏完全佐劑混合，對權利要求6中所述的實驗動物進行多點注射；

（C2）3-6周后，再用相同的左乙拉西坦人工抗原溶液與等量弗氏不完全佐劑混合，對上述實驗動物進行多點注射，之后每隔3-6周注射一次，共計注射3-10次；

（C3）對步驟（C2）中完成注射的實驗動物取血，分離純化，得到抗左乙拉西坦特異性抗體。

8.如權利要求6-7任一項所述的抗左乙拉西坦特異性抗體的應用，其特征在于，將所述抗左乙拉西坦特異性抗體用于制備左乙拉西坦檢測試劑，所述左乙拉西坦檢測試劑包括左乙拉西坦均相酶免疫檢測試劑與左乙拉西坦膠乳增強免疫比濁檢測試劑。

9.根據權利要求8所述的抗左乙拉西坦特異性抗體的應用，其特征在于，所述左乙拉西坦均相酶免疫檢測試劑，由R1試劑與R2試劑組成，所述R1試劑包含權利要求6-7任一項所述的抗左乙拉西坦特異性抗體與R1緩沖液，所述R2試劑包含左乙拉西坦葡萄糖-6-磷酸脫氫酶標記偶聯物與R2緩沖液；

所述的R1緩沖液含有酶底物、輔酶、牛血清白蛋白及Tris緩沖液，所述的酶底物為葡萄糖-6-磷酸，所述的輔酶為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸；

所述的左乙拉西坦葡萄糖-6-磷酸脫氫酶標記偶聯物由權利要求1所述的左乙拉西坦衍生物與葡萄糖-6-磷酸脫氫酶偶聯而成；其結構式如式Ⅲ所示：

式Ⅲ；

所述的R2緩沖液為含有牛血清白蛋白的Tris緩沖液。

10.根據權利要求8所述的抗左乙拉西坦特異性抗體的應用，其特征在于，所述左乙拉西坦膠乳增強免疫比濁檢測試劑，由L1試劑與L2試劑組成；

所述L1試劑由權利要求6-7任一項所述的抗左乙拉西坦特異性抗體、pH=8.0的緩沖液、牛血清白蛋白、氯化鈉、吐溫-20、丙三醇、乙二胺四乙酸、促凝劑以及防腐劑組成；

所述L2試劑由左乙拉西坦-牛血清白蛋白復合體包被的聚苯乙烯膠乳顆粒、pH=8.0的緩沖液、牛血清白蛋白、氯化鈉、吐溫-20、丙三醇、乙二胺四乙酸以及防腐劑組成；

所述的左乙拉西坦-牛血清白蛋白復合體由權利要求1所述的左乙拉西坦衍生物與牛血清白蛋白偶聯而成，其結構式如式Ⅳ所示：

式Ⅳ；

所述的聚苯乙烯膠乳顆粒直徑范圍為50-250nm；

所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、MES緩沖液、硼酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液或巴比妥緩沖液中的一種；

所述促凝劑為PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000或硫酸葡聚糖鈉中的一種；

所述防腐劑為疊氮鈉、硫柳汞、苯酚或乙基汞硫代硫酸鈉中的一種。