[發明專利]一種SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法

在審

• 申請號: 202011558939.1
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112481255A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 戴方平;陳東生;程艷兵;張韋唯
• 申請（專利權）人: 江蘇中方基因生物醫學科技有限公司;武漢菲沙基因信息有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 沈留興

本發明提供了一種SARS?CoV?2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法，根據3’端恒定區特異性引物進行反轉錄，獲得包含完整可變區的全長轉錄本cDNA，然后使用5’端可變區特異性引物和恒定區引物對上述反轉錄制備的cDNA進行PCR擴增，即獲得全長輕鏈序列。本發明提供了簡單、快速、高效的從感染SARS?CoV?2冠狀病毒患者血液中特異性擴增抗SARS?CoV?2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的方法，為冠狀病毒抗體的深入研究奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法。

背景技術

冠狀病毒是一類可感染人及多種脊椎動物的單股正鏈RNA病毒，是引起人普通感冒以及上呼吸道感染的重要病原體，嚴重威脅人類健康。2019年底流行的SARS-CoV-2冠狀病毒具有傳播快、疫情重、進展迅速特點。在部分患者中導致呼吸功能進行性障礙并引起死亡。目前對SARS-CoV-2冠狀病毒的藥物研究包括疫苗、抗體等。1年多時間內，全球對抗體的研究越來越重視，然而最新發表的研究中對抗體的研發都是基于CDR3片段進行的，這也是抗體有效性弱、研發進展緩慢的一大原因。

因此，亟需一種簡單高效的擴增方法能夠快速擴增出SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、簡單、高效的SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法。

為實現上述目的，本發明提供一種SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法，包括以下步驟：

S1、提取總RNA：在SARS-CoV-2冠狀病毒患者或康復患者血液中提取總RNA；

S2、反轉錄反應制備cDNA：在該反轉錄反應中，使用3’端恒定區特異性引物進行反轉錄，得到包含完整可變區的全長轉錄本cDNA，并且是抗SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長cDNA序列；

S3、SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列擴增：使用5’端可變區特異性上游引物和3’端恒定區特異性下游引物對上述反轉錄制備的cDNA進行PCR擴增，即獲得全長輕鏈序列。

進一步地，在所述步驟S2中，反轉錄反應中3’端恒定區特異性引物設計模板SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

進一步地，在所述步驟S2中，反轉錄反應中SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈3’端恒定區特異性引物核苷酸序列P1為GGGTGAGGTGAAAGATGAGC。

進一步地，在所述步驟S3，SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列擴增過程中，使用的5’端可變區特異性上游引物核苷酸序列P2為GTCAGGACACAGCATGGACA。

進一步地，在所述步驟S3，SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列擴增過程中，使用的3’端恒定區特異性下游引物核苷酸序列P3為TCCCTCTAACACTCTCCCCT。

本發明在反轉錄過程中，使用3’端恒定區特異性引物進行反轉錄，獲得包含完整可變區的全長轉錄本cDNA。然后，使用5’端可變區特異性上游引物和3’端恒定區特異性下游引物對上述反轉錄制備的cDNA進行PCR擴增，即獲得全長輕鏈序列。

本發明的有益效果： 提供了快速、簡單、高效的SARS-CoV-2冠狀病毒抗體輕鏈全長序列的擴增方法，為冠狀病毒抗體的深入研究奠定了基礎。

附圖說明

圖1為全長輕鏈PCR產物瓊脂糖電泳圖。

具體實施方式

為了使本領域的普通技術人員能更好的理解本發明的技術方案，下面結合附圖和實施例對本發明的技術方案做進一步的描述。

實施例1：