[發(fā)明專利]一種虎長(zhǎng)效干擾素及其制備方法和在抗流感病毒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011554908.9
• 申請(qǐng)日: 2020-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN112661860B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任志廣;高玉偉;夏咸柱;陳明濤;邱薇;楊爭(zhēng)艷;王鐵成;馮娜;趙永坤;李元果;楊松濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南大學(xué);軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/866;A61K38/21;A61K47/64;A61P31/16
• 代理公司: 北京欣鼎專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11834
• 代理人: 盧萍

1.一種長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB，其特征在于，所述IFN-α+ALB的氨基酸序列如SEQID?NO.1所示；所述IFN-α+ALB基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

2.如權(quán)利要求1所述長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、重組桿狀病毒Bacmid質(zhì)粒的構(gòu)建：將IFN-α+ALB基因與pFastBac1載體的基因進(jìn)行多克隆位點(diǎn)分析，選擇載體上提供而目的片段中沒有的兩個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)：EcoRI和NotI，雙酶切后將回收目的片段插入到昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體?pFastBac1中，得到質(zhì)粒pFastBac-IFN-α+ALB；然后，將質(zhì)粒加入到DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)冰浴，42℃熱激，再次冰浴后，加入無(wú)抗性的LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48h，挑取白斑菌落，加入LB培養(yǎng)基，37℃搖床培養(yǎng)12h，提取質(zhì)粒DNA進(jìn)行PCR?鑒定，鑒定正確的陽(yáng)性質(zhì)粒即為重組桿狀病毒Bacmid質(zhì)粒；

步驟二、重組桿狀病毒的拯救：用重組桿狀病毒Bacmid質(zhì)粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，拯救獲得重組桿狀病毒；

步驟三、蛋白的大量表達(dá)及純化：將獲得的重組桿狀病毒按MOI=3感染昆蟲細(xì)胞，3天后收獲上清，將獲得的上清通過(guò)鎳柱親和層析的方式純化，即可得到長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB。

3.如權(quán)利要求2所述的長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB的制備方法，其特征在于，所述步驟二中當(dāng)昆蟲細(xì)胞的細(xì)胞匯合達(dá)到?80％以上時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

4.如權(quán)利要求2所述的長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB的制備方法，其特征在于，所述步驟三中的純化操作方法為將上清加入到鎳柱中使其充分結(jié)合，然后用25mM的咪唑沖洗，再用250mM的咪唑洗脫。

5.如權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)效干擾素蛋白IFN-α+ALB在制備老虎抗流感病毒藥物中的應(yīng)用。