[發(fā)明專利]一種肝硬化相關生物標志物及其篩選方法和應用

在審

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• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112782297A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設計）人: 郭繼生
• 申請（專利權）人: 郭繼生
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發(fā)明提供一種肝硬化相關生物標志物及其篩選方法和應用，屬于生物醫(yī)學和分子生物學技術領域。本發(fā)明基于HBV肝硬化病理環(huán)境下，相關的代謝小分子發(fā)生數(shù)量變化，進而在血中蛋白分子(質(zhì)譜分析中以PSMs肽段形式展現(xiàn))上非特異結合的代謝小分子也發(fā)生數(shù)量變化，從而建立檢測目標分子連接組(Connectomes)策略，通過精準的質(zhì)譜分析，檢測到目前技術條件下的可識別、最準確的分子質(zhì)量，從而發(fā)現(xiàn)一系列HBV相關肝硬化的非創(chuàng)診斷指標，為HBV肝硬化的及時診斷奠定基礎，因此具有良好的實際應用之價值。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學和分子生物學技術領域，具體涉及一種肝硬化相關生物標志物及其篩選方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經(jīng)成為本領域一般技術人員所公知的現(xiàn)有技術。

慢性HBV感染進展為肝硬化的5年累積發(fā)生率為8％-20％，有研究認為肝硬化發(fā)生與HBeAg持續(xù)陽性有關，同時沒有靈敏性和特異性較好的分子診斷指標。《肝衰竭診治指南》指出，考慮到一旦因肝硬化引起肝衰竭，治療極其困難，病死率高，因此重視乙型肝炎重癥化或肝硬化發(fā)生的及時診斷和預警已成為共識。乙型肝炎肝硬化的及時診斷及有效分子指標的確定具有非常重要的意義。

HBV相關的代償期肝硬化進一步進展可導致失償期肝硬化和原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，臨床上應用甲胎蛋白alpha-fetoprotein(AFP)來診斷肝癌(hepatocellular carcinoma)，但這個診斷的靈敏性和特異性比較低，所以發(fā)現(xiàn)靈敏性和特異性好的肝硬化指標非常重要。

蛋白質(zhì)組學分析是近年國際比較先進的前沿分子生物學技術，廣泛用于疾病診斷中的蛋白及相關分析。而能把蛋白質(zhì)組學很好應用在臨床診斷上的實踐不是很多，經(jīng)常出現(xiàn)蛋白組學的樣品處理和分析方法不能正確適應臨床疾病診斷等問題。因此臨床分析樣品需要進行與臨床疾病診斷目的相匹配的處理方法，以及正確的質(zhì)譜分析方法，同時質(zhì)譜分析后的結果進行專業(yè)生物信息學分析，最后進行分析結果驗證。同時，選擇的分析目標策略應盡可能接近臨床疾病中的生理病理環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術存在的不足，本發(fā)明提供一種肝硬化相關生物標志物及其篩選方法和應用。本發(fā)明基于HBV肝硬化病理環(huán)境下，相關的代謝小分子發(fā)生數(shù)量變化，進而在血中蛋白分子(質(zhì)譜分析中以PSMs肽段形式展現(xiàn))上非特異結合的代謝小分子也發(fā)生數(shù)量變化，從而建立檢測目標分子連接組(Connectomes)策略，通過精準的質(zhì)譜分析，檢測到目前技術條件下的可識別、最準確的分子質(zhì)量，從而發(fā)現(xiàn)一系列HBV相關肝硬化的非創(chuàng)診斷指標，為HBV肝硬化的及時診斷奠定基礎，因此具有良好的實際應用之價值。

本發(fā)明中，建立質(zhì)譜分析目標分子的連接組(connectomes)策略，即是將連接組作為質(zhì)譜分析的靶分子。連接組策略是結合代謝組學和蛋白質(zhì)組學的結果，具體是代謝小分子和PSM肽段(是蛋白分子在質(zhì)譜檢測過程的表現(xiàn)形式)的結合物，反映的是生理和病理環(huán)境中，代謝小分子和蛋白之間非特異的廣泛結合(主要通過化學反應形式)。這樣可以以蛋白為載體，能夠穩(wěn)定反映結合在蛋白分子上的代謝小分子在不同生理病理下的變化。

具體的，本發(fā)明涉及以下技術方案：

本發(fā)明的第一個方面，提供一種肝硬化相關生物標志物，所述生物標志物包括如下任意一種或多種：

質(zhì)量偏移+163Da的PSMs、質(zhì)量偏移+189.2Da的PSMs、質(zhì)量偏移+5Da的PSMs和質(zhì)量偏移-76Da的PSMs。

需要說明的是，所述質(zhì)量偏移同時也包含上下浮動0.5Da的質(zhì)量偏移數(shù)。