[發(fā)明專(zhuān)利]一種全新基因組合模式在小鼠中建立胰腺癌的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011553315.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114672517A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙旭東;孫彬;涂秋;嚴(yán)蘭珍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/867
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/867;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 張璐;徐迅

1.一種非人哺乳動(dòng)物的胰腺癌動(dòng)物模型的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟：提供一非人哺乳動(dòng)物，向所述非人哺乳動(dòng)物中引入KRAS突變，并且敲降所述非人哺乳動(dòng)物體內(nèi)的Tp53、Cdkn2a和Smad4的表達(dá)。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(a)獲得一慢病毒，所述慢病毒中含有過(guò)表達(dá)KRAS突變體和敲降Tp53、Cdkn2a和Smad4表達(dá)的核苷酸序列；

(b)用所述慢病毒感染非人哺乳動(dòng)物胰腺頭部。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述非人哺乳動(dòng)物為成年的小鼠。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述的慢病毒中包括一外源核酸構(gòu)建物，所述的核酸構(gòu)建物包括以下元件：

(i)KRAS突變型基因序列及其啟動(dòng)子I；

(ii)靶向Tp53基因的shRNA序列及其啟動(dòng)子II；

(iii)靶向Cdkn2a基因的shRNA序列及其啟動(dòng)子III；和

(iv)靶向Smad4基因的shRNA序列及其啟動(dòng)子IV。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的核酸構(gòu)建物中具有從5’端到3’端如下所示的結(jié)構(gòu)：H1-shTp53-CMV-KRAS^G12D-U6-shCdkn2a-U6-shSmad4。

6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的胰腺癌是胰腺導(dǎo)管腺癌。

7.一種如權(quán)利要求1所述方法制備的非人哺乳動(dòng)物模型的用途，其特征在于，該模型被用作研究人胰腺癌的動(dòng)物模型。

8.一種如權(quán)利要求1所述方法制備的非人哺乳動(dòng)物模型的用途，其特征在于，該模型被用于篩選或鑒定可減輕或治療人胰腺癌的物質(zhì)(或治療劑)。

9.一種用如權(quán)利要求1所述的方法制備的非人哺乳動(dòng)物模型。

10.一種篩選或鑒定治療或緩解胰腺癌的潛在治療劑的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)將候選物質(zhì)施用于如權(quán)利要求所述方法制備的非人哺乳動(dòng)物模型；和

(b)對(duì)所述動(dòng)物模型的表型或癥狀進(jìn)行分析，并與對(duì)照組進(jìn)行比較；

其中，與對(duì)照相比，如果施用了候選物質(zhì)的動(dòng)物模型中表征胰腺癌的癥狀得到改善，則表明該候選物質(zhì)是人胰腺癌的潛在治療劑。