[發明專利]一種固體芽孢桿菌微生物菌劑及其應用

有效

• 申請號: 202011553312.7
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112980718B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 張琪;盤文政;李勇杰;趙崇鈞;唐建波;華小兵;楊潤霞;毛明林;王斌;徐思琪;肖勇飛
• 申請（專利權）人: 云南省微生物發酵工程研究中心有限公司;云南云葉化肥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N11/14;C12N11/10;C05F11/08;C05F17/20;C12R1/07
• 代理公司: 昆明鴻昊知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53211
• 代理人: 陳芃綦

1.一種固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，所述固體芽孢桿菌微生物菌劑是通過將芽孢桿菌菌種進行多級培養后得到的發酵液進行濃縮離心，再將濃縮離心后得到的菌種濃縮液進行噴霧干燥制得的芽孢桿菌微生物菌粉，并且所述微生物菌劑中的芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10¹¹CFU/g；其中，

所述芽孢桿菌菌種的多級培養包括如下過程：

將芽孢桿菌菌種接種到液體培養基中培養制得接種液；將接種液在滅菌液體培養基A的環境下進行一次發酵得到發酵液A；將發酵液A在滅菌液體培養基B的環境下進行二次發酵得到發酵液B；

將濃縮離心后得到的菌種濃縮液進行噴霧干燥包括如下過程：

將菌種濃縮液加入攪拌罐中，加入10％～13％的輔料，通過0.9Pa的壓力將所述菌種濃縮液壓至旋轉噴頭，并使噴頭保持在轉速為20000r/min下噴霧，同時在干燥塔中通入150℃、4000m³/h的熱風進行干燥，經過噴霧干燥后制得芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10¹¹CFU/g的芽孢桿菌微生物菌粉；

所述輔料包括如下重量份的組分：硅藻土55～65份，碳酸鈣15～25份，淀粉15～25份；

所述芽孢桿菌為解淀粉芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和/或地衣芽孢桿菌；其中，

解淀粉芽孢桿菌，其編號為WSWFJ45，保藏登記號為CGMCC?No.20148；

枯草芽孢桿菌，其編號為WSWFJ34，保藏登記號為CGMCC?No.20141；

地衣芽孢桿菌，其編號為WSWFJ47，保藏登記號為CGMCC?No.20149。

2.根據權利要求1所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，將芽孢桿菌菌種接種到液體培養基中培養制得接種液包括如下過程：

將準備好的芽孢桿菌菌種，按照3‰～5‰的比例接種到液體LB培養基中，在35℃～38℃條件下振蕩培養24h后得到接種液，并使接種液中的芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10⁸CFU/mL。

3.根據權利要求1所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，將接種液在滅菌液體培養基A的環境下進行一次發酵得到發酵液A包括如下過程：

將制備的接種液接種到發酵罐中，加入占發酵罐體積60％～70％的滅菌液體培養基A，保持罐內溫度37℃，供氧氣量15m³/h，發酵17h～20h后得到發酵液A，并使發酵液A中的芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10⁸CFU/mL。

4.根據權利要求1所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，將發酵液A在滅菌液體培養基B的環境下進行二次發酵得到發酵液B包括如下過程：

將發酵液A導入發酵罐中，加入占發酵罐體積60％～70％的滅菌液體培養基B，保持罐內溫度37℃，供氧氣量15m³/h，發酵23～25h后得到發酵液B，并使發酵液B中的芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10⁹CFU/mL。

5.根據權利要求3或4所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，所述液體培養基A包括如下重量份的組分：黃豆粉5g/L，玉米粉5g/L，蔗糖12g/L，蛋白胨10g/L，魚粉7g/L，碳酸鈣4g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，硫酸錳1g/L，硫酸銨1.2g/L；

所述液體培養基B包括如下重量份的組分：黃豆粉14g/L，玉米粉4g/L，蔗糖3g/L，蛋白胨2g/L，魚粉2g/L，碳酸鈣6g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，硫酸鎂0.3g/L，硫酸錳0.2g/L，磷酸氫二鉀0.3g/L，氯化鈉0.3g/L，硫酸銨0.5g/L，氫氧化鈉0.25g/L。

6.根據權利要求1所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑，其特征在于，將芽孢桿菌菌種進行多級培養后得到的發酵液進行濃縮離心包括如下過程：

將芽孢桿菌菌種進行多級培養后得到的發酵液導入碟式離心機中，在轉速6000r/min下離心15min，離心后排除上層菌懸液，得到菌種濃縮液，并使菌種濃縮液中的芽孢桿菌有效活菌數不小于1×10¹⁰CFU/mL。

7.一種權利要求1至6之一所述的固體芽孢桿菌微生物菌劑的應用，其特征在于，所述固體芽孢桿菌微生物菌劑通過蘸根、灌根、澆施和葉面噴施中的一種或多種方法向作物施用；或者是所述固體芽孢桿菌微生物菌劑與肥料進行配伍制成生物肥料作為底肥施用；或者是所述固體芽孢桿菌微生物菌劑作為發酵菌種用于有機廢棄物發酵腐熟。