[發明專利]一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒

在審

• 申請號: 202011552885.8
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112592966A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 魏子涵;王曉娜;李宏鑫
• 申請（專利權）人: 上海融享生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 福州科揚專利事務所(普通合伙) 35001
• 代理人: 郭夢羽

1.一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒含有與EGFR基因T790M位點結合的探針結合預混液、酶促反應預混液和信號放大預混液；

所述探針結合預混液包括特異性識別檢測人類EGFR基因20號外顯子上T790M突變位點并帶有修飾的環鎖核酸探針引物、RecA蛋白、單鏈結合蛋白以及促進探針結合緩沖液；所述環鎖核酸探針引物包含與EGFR基因上可結合部分和非特異結合部分，環鎖核酸探針引物序列如SEQ ID NO.1；

所述酶促反應預混液包括高保真高溫連接酶、四種隨機脫氧核糖核苷酸dNTP和酶促反應緩沖液；

所述信號放大預混液包括具有鏈置換活性的等溫擴增酶、鏈置換等溫擴增的引物dNTP、結合雙鏈DNA的Green熒光染料和促進酶反應活性緩沖液。

2.如權利要求1所述的一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還含有純合子陽性對照品、陰性對照品和標準品；

所述純合子陽性對照品為濃度15ng/μL的與探針結合預混液中環鎖核酸探針結合但不促進環鎖探針成環的合成DNA雙鏈片段；

所述陰性對照品為濃度15ng/μL的與探針結合預混液中環鎖核酸探針結合且促進環鎖探針成環的合成DNA雙鏈片段；

所述標準品為用于熒光計檢測的雙鏈DNA片段，由低濃度DNA和高濃度DNA兩管組分組成。

3.如權利要求1所述的一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述探針結合預混液中的促進探針結合緩沖液pH為7.5，促進探針結合緩沖液包括但不限于Tris-HCl、MgCl₂、DTT、ATP、EDTA或甘油中的一種。

4.如權利要求1所述的一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述酶促反應預混液中的酶促反應緩沖液pH為7.6，酶促反應緩沖液包括但不限于Tris-HCl、醋酸鉀、醋酸鎂、NADⅠ型輔酶、DTT、Triton X-100或甘油中的一種。

5.如權利要求1所述的一種快速檢測EGFR基因耐藥突變的試劑盒，其特征在于：所述信號放大預混液中的促進酶反應活性緩沖液的pH為7.5，促進酶反應活性緩沖液包括但不限于Tris-HCl、MgCl₂、(NH₄)₂SO₄、DTT或甘油中的一種。