[發(fā)明專利]一種抗氧化效能的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011551840.9
• 申請(qǐng)日: 2020-12-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112641429A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋姣;張文娟;秦燕;魯楠;朱旗揚(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海百雀羚生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61B5/00
• 分類號(hào): A61B5/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

本發(fā)明公開(kāi)一種抗氧化效能的檢測(cè)方法。所述方法包括熒光檢測(cè)皮膚中類胡蘿卜素的量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及到類胡蘿卜素作為抗氧化指標(biāo)，熒光光譜在體檢測(cè)產(chǎn)品的抗氧化性能的方法。

背景技術(shù)

皮膚氧化損傷會(huì)導(dǎo)致皮膚產(chǎn)生過(guò)多的自由基，而這些自由基會(huì)攻擊肌膚細(xì)胞，引起肌體老化、肌膚衰老以及免疫力下降，造成膠原和彈性纖維松弛，表皮細(xì)胞新生減緩、臉色暗沉，水分大量流失等。

目前對(duì)于抗氧化劑的評(píng)價(jià)方法主要分為體外和體內(nèi)兩類。體外評(píng)估方法主要包括DPPH、超氧、羥基自由基等自由基清除試驗(yàn)，體外模擬生成活性氧自由基，易受溶劑體系的影響，與機(jī)體的細(xì)胞水平的自由基有很大差距，無(wú)法考慮到抗氧化樣品的吸收，代謝和藥效等因素。體內(nèi)抗氧化評(píng)估主要通過(guò)檢測(cè)抗氧化物質(zhì)(如抗氧化物歧化酶(SOD)、ROS水平等)對(duì)動(dòng)物模型相關(guān)抗氧化指標(biāo)的影響，以反映其抗氧化作用的強(qiáng)弱。動(dòng)物損傷模型的評(píng)價(jià)方法也存在缺點(diǎn)，誘導(dǎo)劑對(duì)動(dòng)物組織損傷使其發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，然后給藥(抗氧化物質(zhì))，檢測(cè)到氧化損傷相應(yīng)的指標(biāo)改善時(shí)，不一定抗氧化應(yīng)激就是其作用機(jī)制，也有可能是藥物的其他作用減輕或緩解了誘導(dǎo)劑對(duì)機(jī)體的傷害，進(jìn)而減弱或消除了組織氧化應(yīng)激損傷的現(xiàn)象。

類胡蘿卜素是皮膚主要的抗氧化系統(tǒng)之一，是具有8個(gè)異戊二烯共軛雙鍵基本單位組成多烯鏈化合物，主要包括胡蘿卜素和葉黃素兩大類，最大吸收峰通常在450～570nm之間。人體自身不能合成類胡蘿卜素，血液和皮膚中的類胡蘿卜素主要來(lái)自于水果和食物的攝入，人每天從食物和水果中攝入的類胡蘿卜素約為6mg。皮膚中的類胡蘿卜素主要有葉黃素、玉米黃質(zhì)、β-隱黃質(zhì)、β-胡蘿卜素、番茄紅素及茄紅素，正常生理狀態(tài)下，它們的含量主要在0–10nmol/g。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，日常連續(xù)攝入含類胡蘿卜素較多的食物和水果(如；胡蘿卜、西蘭花、西紅柿等)，人體內(nèi)的類胡蘿卜素的含量會(huì)相應(yīng)升高。

類胡蘿素在對(duì)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)方面發(fā)揮著重要作用，尤其是β-胡蘿卜素、葉黃素和番茄紅素，其抗氧化活性的主要機(jī)制是：(1)通過(guò)淬滅單線態(tài)氧和消除自由基；(2)淬滅自由基阻斷自氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，防止自由基對(duì)蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA的過(guò)氧化損傷；(3)通過(guò)電子轉(zhuǎn)移的方式來(lái)清除自由基；(4)可以與自由基發(fā)生加成反應(yīng)，形成類胡蘿卜素加合自由基。

目前針對(duì)類胡蘿卜素的測(cè)試方法主要有HPLC法和光學(xué)檢測(cè)法，光學(xué)檢測(cè)法包括共振拉曼光譜法(RRS法)和反射光譜法(RS法)。

HPLC法主要測(cè)試血液或其他組織中的類胡蘿卜素含量，需要活檢和合適的提取方法，除了志愿者的不適，這是一種耗時(shí)的方法，也可能會(huì)導(dǎo)致類胡蘿卜素的氧化損失。因此，它不適合高通量分析和人體皮膚類胡蘿卜素水平變化的動(dòng)力學(xué)分析。

RRS法是一種激光光譜學(xué)方法，用于檢測(cè)分子的振動(dòng)/旋轉(zhuǎn)能級(jí)。典型的類胡蘿卜素RRS譜主要有三個(gè)強(qiáng)而清晰的斯托克斯峰，分別為1525cm-1(C＝C拉伸)、1159cm-1(C-C拉伸)和1008cm-1(C-CH3搖擺運(yùn)動(dòng))，可以此來(lái)定量檢測(cè)類胡蘿卜素的含量。RRS法具有高分子特異性、快速、高靈敏性，可選擇性檢測(cè)胡蘿卜素和番茄紅素，已被應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域中，但該法也存在一定的缺點(diǎn)，如響應(yīng)信號(hào)較弱、儀器設(shè)備復(fù)雜、需要外部的靈敏度校準(zhǔn)，在測(cè)試皮膚中類胡蘿卜素量時(shí)易受黑色素影響。

RS法主要用相同的紫外-可見(jiàn)光譜去測(cè)量β-胡蘿卜素和幾乎所有的類胡蘿卜素(除了α-胡蘿卜素、葉黃素、β-隱黃質(zhì)和番茄紅素)，主要采用Multiscan OS 20分光光度計(jì)和全硅光纖反射束進(jìn)行無(wú)損傷收集350～850nm范圍內(nèi)反射光譜，一般采用二氧化鈦?zhàn)鳛榭瞻讌⒖紭?biāo)準(zhǔn)。RS法具有信號(hào)強(qiáng)度高、快速、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、自我校準(zhǔn)的優(yōu)勢(shì)，但相對(duì)于RRS法其靈敏度和特異性較低，在皮膚中應(yīng)用時(shí)也需要克服皮膚的光學(xué)特性(自發(fā)熒光、皮膚水合、汗液和皮脂生成)干擾及其他有色分子干擾，如黑色素、血紅蛋白、氧血紅蛋白及膽紅素等。

因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種適用于抗氧化劑的在體評(píng)價(jià)的操作簡(jiǎn)單、靈敏且可靠的方法。

發(fā)明內(nèi)容