[發明專利]一種用于維持脂肪間充質干細胞功能的改良增殖培養基

在審

• 申請號: 202011550577.1
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112553154A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 周光宏;宋文娟;李惠俠;丁世杰;劉裴裴
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 競存;徐冬濤

本發明提供一種用于培養肉種子細胞體外擴大培養的改良培養基，即脂肪間充質干細胞的體外擴大培養的改良培養基。改良后的培養基為添加bFGF的生長培養基，采用此改良培養基培養15天獲得的細胞總數是對照生長培養基中獲得的細胞總數的6倍，并且更為重要的是，脂肪間充質干細胞在體外大量擴增，達到需要的細胞數量之后，仍能保持較高的分化能力。因此，改良培養基有助于在體外獲得大量具有功能性的脂肪間充質干細胞，較好地滿足培養肉生產對種子細胞的數量和干細胞功能的需求。

技術領域

本發明屬于干細胞和動物細胞培養肉技術領域，具體地，涉及一種用于維持脂肪間充質干細胞功能的改良培養基。

背景技術

培養肉是利用畜禽干細胞經過體外培養而獲得的肉類，它不需要經過動物養殖，直接用細胞工廠化生產肉類。據報道，作為傳統畜牧業的替代模式，可減少現有畜牧生產系統對環境和動物福利造成的負面影響。目前，關于細胞培養肉的大多研究都集中在肌肉細胞及其組織，雖然脂肪只占肉類的一小部分，但它是影響肉類風味、質地、營養和外觀的關鍵因素。因此，在細胞培養肉制品中生產和摻入脂肪至關重要。

培養肉是需要在體外大量培養具有分化能力的種子細胞。脂肪間充質干細胞是目前培養肉種子細胞選擇中最具有潛力的細胞之一，在一定的誘導條件下，可向成熟脂肪細胞分化。但是研究表明，脂肪間充質干細胞在體外長期擴增過程中容易失去原始干性，表現出增殖分化潛能降低和細胞衰老。

目前公認的體外培養脂肪間充質干細胞的培養基是含10％胎牛血清的DMEM/F12基礎培養基。畜禽脂肪間充質干細胞在體外擴大培養過程中存在著增殖能力不斷衰退，傳代后期的細胞細胞分化效率降低甚至完全喪失分化能力。由于培養肉需要大量的種子細胞，但是目前的培養基體系無法滿足細胞培養肉對種子細胞的數量和功能要求，因此如何建立一種可以維持豬脂肪間充質干細胞功能的培養條件至關重要。

發明內容

本發明的目的是延緩脂肪間充質干細胞在體外擴大培養過程中增殖和分化能力降低的現象，提供一種可以在體外維持豬脂肪間充質干細胞功能的培養基。

本發明的第一個目的是提供一種用于脂肪間充質干細胞體外擴大培養的增殖培養基，所述增殖培養基為向脂肪間充質干細胞生長培養基中添加生長因子后制備得到，所述脂肪間充質干細胞生長培養基包括基礎細胞培養基和胎牛血清。

進一步的，所述生長因子為bFGF。

本發明所述bFGF是指堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)。

進一步的，基礎細胞培養基為DMEM培養基、MEM培養基、DMEM/F12培養基、F10培養基中的一種

進一步的，所述脂肪間充質干細胞生長培養基中，基礎細胞培養基和胎牛血清的體積比為9:1。

進一步的，所述bFGF在脂肪間充質干細胞生長培養基中的濃度為1-10ng/mL。

進一步的，所述bFGF在脂肪間充質干細胞生長培養基中的濃度為5ng/mL。

本發明的第二個目的是提供bFGF在促進脂肪間充質干細胞體外培養過程中的增殖速度，和/或維持脂肪間充質干細胞體外培養過程中的分化潛能中的應用，具體的，所述應用為將bFGF添加到脂肪間充質干細胞生長培養基中，獲得前述的增殖培養基，利用所述增殖培養基對脂肪間充質干細胞進行體外擴大培養。

本發明的第三個目的是提供前述的增殖培養基在促進脂肪間充質干細胞體外培養過程中的增殖速度，和/或維持脂肪間充質干細胞體外培養過程中的分化潛能。

本發明所述的脂肪間充質干細胞包括但不限于豬脂肪間充質干細胞，牛脂肪間充質干細胞、羊脂肪間充質干細胞、鼠脂肪間充質干細胞。