[發(fā)明專利]一種用于綿羊卵巢皮質(zhì)組織體外培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011550026.5
• 申請(qǐng)日: 2020-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN112458041A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭夏雨;孫鳳霞;康立超;王靜;魏勇;胡廣東;陳磊;蔣松;祁鳳華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 石河子大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 重慶博凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 李媛

本發(fā)明公開了一種用于綿羊卵巢皮質(zhì)組織體外培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液，所述培養(yǎng)液包括基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加物，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為α?MEM和DMEM的混合液；所述添加物包括以下含量的組分：3~10mg/mL牛血清白蛋白、0.10~0.50mM丙酮酸鈉、1~5 mM谷氨酰胺、1~5mM次黃嘌呤、3~10μg/mL胰島素、1~5μg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白、2~8ng/mL亞硒酸鈉、10~200μg/mL V_C、50~200IU/mL青霉素和50~200IU/mL鏈霉素，pH 6.9~7.5。本發(fā)明通過各組分間的協(xié)同作用，既抑制間質(zhì)細(xì)胞的增殖速度，又促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖，解決了卵巢皮質(zhì)組織在培養(yǎng)過程中間質(zhì)細(xì)胞過度增殖導(dǎo)致組織塌陷無法維持原始卵泡發(fā)育的立體環(huán)境的缺陷，有效提高了卵巢皮質(zhì)組織中原始卵泡在體外的生長(zhǎng)發(fā)育情況和存活時(shí)間，同時(shí)避免了血清中未知成分對(duì)研究的影響，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于綿羊卵巢皮質(zhì)組織體外培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液。

背景技術(shù)

卵巢作為雌性生育的繁殖基礎(chǔ)，含有大量的處于不同發(fā)育階段的卵泡，是雌性繁殖力的儲(chǔ)備庫(kù)。在生理狀態(tài)下，90%以上的卵泡以休眠狀態(tài)的原始卵泡形式存在于卵巢皮質(zhì)中，并在生殖相關(guān)激素激素、生長(zhǎng)因子作用下一批批被募集激活進(jìn)入發(fā)育卵泡階段。遺憾的是隨著個(gè)體的發(fā)育進(jìn)行，大部分卵泡都由于退化而損失，只有不到1%卵泡會(huì)發(fā)育至成熟卵子并最終受精產(chǎn)生后代，這是對(duì)雌性動(dòng)物繁殖力的極大浪費(fèi)。目前對(duì)雌性綿羊卵巢內(nèi)卵泡的利用主要集中在次級(jí)卵泡以后的卵泡尤其是有腔卵泡，這部分卵泡對(duì)數(shù)以萬計(jì)的卵巢卵泡而言，只是其中很少的一部分。隨著克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，將來對(duì)卵母細(xì)胞的需求越來越大，光靠回收竇腔卵泡中的卵子已不能滿足需求。通過體外培養(yǎng)卵巢組織或卵泡，復(fù)蘇卵巢中占主導(dǎo)地位的原始卵泡的生長(zhǎng)和發(fā)育，可以加深我們對(duì)卵泡發(fā)育，排卵和閉鎖的生理調(diào)節(jié)機(jī)制的了解，為輔助生育技術(shù)及其他生物工程技術(shù)提供潛在的額外的同種質(zhì)卵母細(xì)胞來源，對(duì)于提高高遺傳和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的家畜以及在科研上具有重要價(jià)值的動(dòng)物的繁殖潛力，珍稀或?yàn)l危動(dòng)物的保護(hù)以及人類生育能力的保存和輔助受孕具有重大意義。

目前對(duì)卵巢組織或分離卵泡的體外培養(yǎng)已經(jīng)開展了許多研究，方法實(shí)例包括分離卵泡的三維培養(yǎng)、卵巢皮質(zhì)和髓質(zhì)共培養(yǎng)、整個(gè)卵巢的器官培養(yǎng)、卵巢皮質(zhì)組織的培養(yǎng)等。在體內(nèi)環(huán)境下，原始卵泡的激活和生長(zhǎng)發(fā)育的發(fā)生受到年齡、營(yíng)養(yǎng)水平、激素環(huán)境以及多種生長(zhǎng)因子等諸多因素的綜合影響，且原始卵泡與卵巢間質(zhì)細(xì)胞、卵巢髓質(zhì)細(xì)胞、顆粒細(xì)胞以及其他發(fā)育階段卵母細(xì)胞等的細(xì)胞間交流通訊也會(huì)對(duì)其激活過程產(chǎn)生影響，所以這一過程在體內(nèi)環(huán)境下存在許多的不可控因素或相關(guān)抑制干擾。而在體外培養(yǎng)模式下，可以人為的去除大部分干擾因素，為研究原始卵泡的激活和生長(zhǎng)發(fā)育過程提供了一種條件限定的可控研究環(huán)境，這種可控研究環(huán)境可以幫助我們鑒定調(diào)節(jié)卵巢功能的相關(guān)因子對(duì)卵泡發(fā)育的影響，這些因子的鑒定在體內(nèi)條件下可能不易完成或很難確定。通過限定條件的體外培養(yǎng)體系的研究我們可以對(duì)各種因子，激素或相關(guān)生理信號(hào)途徑的促進(jìn)劑或抑制劑，以及某些對(duì)生殖有毒有害的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定。而如何開發(fā)能有效支持卵巢原始卵泡長(zhǎng)期存活、成分已知且更接近于生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)需求的培養(yǎng)液是進(jìn)行原始卵泡體外激活研究的基礎(chǔ)。