[發明專利]一株重金屬耐受腈化物降解菌及其在生產有機酸中的應用

有效

• 申請號: 202011548028.0
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN113373076B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 郗麗君;王佳宇;劉建國;王淼
• 申請（專利權）人: 中國石油大學（華東）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/42;C12P7/40;C12P17/12;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株重金屬耐受腈化物降解和扁桃酸、丙烯酸生產菌亮桿菌(Leucobacter sp.)DLY11，其特征在于：該菌已于2020年6月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：中國，北京，北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；郵編：100101)，其保藏編號為CGMCC No：1.16127。

2.權利要求1所述的亮桿菌(Leucobacter sp.)CGMCC No：1.16127在腈化物降解中的應用，其特征在于：

腈化物降解用培養基配制方法、降解底物和培養條件分別為：

(1)活化培養基的配方：胰蛋白胨大豆肉湯培養基30g，用ddH₂O溶解并定容至1L，調pH至7.0；

(2)腈化物降解用基礎培養基的配制方法為：將磷酸氫二鈉2.0g、磷酸二氫鉀1.0g、酵母粉0.5g、硫酸鎂0.2g、硫酸亞鐵0.03g，溶于800mL Na₂HPO₄/NaH₂PO₄緩沖液，然后加入甘油3.25mL并混勻，然后用Na₂HPO₄/NaH₂PO₄緩沖液定容至1L；

(3)降解底物為：扁桃腈、丙烯腈、3-氰基吡啶、己二腈和正戊腈中的任意一種，所述底物的加入量為20mM；

(4)培養條件：在轉速為150rpm的搖床中于30℃培養。

3.權利要求1所述的亮桿菌(Leucobacter sp.)CGMCC No：1.16127生產丙烯酸的方法，其特征在于：

(1)制備菌懸液：按10％接種量接種亮桿菌DLY11的種子液至含10mM丙烯腈的權利要求2所述腈化物降解用基礎培養基，振蕩培養48h，收集菌體沉淀并制備菌懸液；

(2)利用丙烯腈生產丙烯酸：取含20mM丙烯腈的權利要求2所述腈化物降解用基礎培養基，加入菌懸液，30℃、150rpm振蕩培養104h。每次取樣5mL進行檢測；每次取樣后在培養體系中加入20mM丙烯腈。

4.權利要求1所述的亮桿菌(Leucobacter sp.)CGMCC No：1.16127生產扁桃酸的方法，其特征在于：

(1)制備菌懸液：挑取單菌落接種至活化培養基中，在恒溫搖床30℃，150rmp中振 蕩培養48h，然后以3％的接種量重復上述活化步驟后，收集菌體并制備菌懸液；

(2)利用扁桃腈生產扁桃酸：權利要求2所述腈化物降解用基礎培養基中分別加入上述菌懸液和濃度為10mM、30mM、50mM的扁桃腈，即分別為1.33g/L、3.99g/L、6.65g/L，30℃、150rpm振蕩培養。