[發(fā)明專利]一種基于體外消化/Caco2 在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011543911.0 | 申請日： | 2020-12-23 |
| 公開（公告）號： | CN112557495A | 公開（公告）日： | 2021-03-26 |
| 發(fā)明（設計）人： | 左甜甜;羅飛亞;馬雙成;金紅宇;孫磊;邢書霞;李波;高飛;康帥 | 申請（專利權）人： | 中國食品藥品檢定研究院 |
| 主分類號： | G01N27/626 | 分類號： | G01N27/626;G01N1/28;G01N1/34 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 薛紅凡 |
| 地址： | 100010*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 體外 消化 caco base sub | ||
1.一種基于體外消化/Caco2細胞模型測定冬蟲夏草中砷的生物可給性方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)在厭氧條件下，將冬蟲夏草粉末在模擬胃液中消化，得到胃消化液和殘渣；
2)將所述殘渣在模擬腸液中消化，得到腸道消化液；
3)吸棄Caco-2細胞模型的原有培養(yǎng)液，將所述腸道消化液加入到腸腔室中，將新鮮細胞培養(yǎng)液加入基底室，經(jīng)細胞轉化后，將得到的細胞培養(yǎng)液過膜，收集濾液進行電感耦合等離子體質譜分析，得到砷含量，計算砷的生物可給性。
2.根據(jù)權利要求1所述生物可給性方法，其特征在于，步驟3)中Caco-2細胞模型的建立方法，包括以下步驟：
將Caco-2細胞培養(yǎng)生長融合至80％以上時，用含質量濃度0.25％胰酶的EDTA溶液進行消化，調整細胞密度至3×105～5×105·mL-1，接種于Transwell聚碳酸酯膜于24孔板中培養(yǎng)，待跨膜電阻大于200Ω·cm2時，得到Caco-2細胞模型。
3.根據(jù)權利要求1所述生物可給性方法，其特征在于，步驟1)中冬蟲夏草粉末在模擬胃液中消化的方法為將冬蟲夏草粉末在模擬胃液中恒溫震蕩，離心，取上清液濃縮，加入硝酸消解，得到消解液；
所述冬蟲夏草粉末的質量和模擬胃液的體積比為0.5g：50mL。
4.根據(jù)權利要求1或3所述生物可給性方法，其特征在于，所述模擬胃液的配制方法為將1.25g胃蛋白酶、0.5g檸檬酸鈉、0.5g蘋果酸鈉、420μL乳酸和500μL乙酸溶解后定容至1L，調節(jié)pH值至1.5。
5.根據(jù)權利要求1或3所述生物可給性方法，其特征在于，所述冬蟲夏草粉末的粒徑為50～80目。
6.根據(jù)權利要求1所述生物可給性方法，其特征在于，步驟2)中所述殘渣在模擬腸液中消化的方法為將所述殘渣在模擬腸液中恒溫震蕩，離心，取上清液濃縮，加入硝酸消解，得到消解液；
每0.5g冬蟲夏草粉末得到的殘渣用50mL模擬腸液處理。
7.根據(jù)權利要求1或6所述生物可給性方法，其特征在于，所述模擬腸液的制備方法為將0.5g胰酶和1.75g膽酸鈉溶解后定容至1L，調節(jié)pH值至7.0。
8.根據(jù)權利要求1所述生物可給性方法，其特征在于，步驟3)中細胞轉化是將分別添加有腸道消化液和新鮮細胞培養(yǎng)液的Caco-2細胞模型置于37℃、5％CO2、相對濕度90％的環(huán)境中培養(yǎng)4h。
9.根據(jù)權利要求1、2、3、6和8所述生物可給性方法，其特征在于，步驟3)中所述細胞培養(yǎng)液為含體積濃度10％FBS的DMEM高糖培養(yǎng)液。
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