[發明專利]多配體蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟熱病毒復制中的應用

有效

• 申請號: 202011543497.3
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112656806B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 姜騫;曲連東;劉家森;郭東春;楊鳴發;康洪濤;田進
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7105;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發明公開了多配體蛋白聚糖4的siRNA序列在抑制犬瘟熱病毒復制中的應用。所述的多配體蛋白聚糖4的siRNA序列通過降低多配體蛋白聚糖4的表達水平進而達到抑制犬瘟熱病毒復制的作用。實驗證明，SDC4 siRNA轉染對細胞毒性低，不會影響細胞正常存活與增殖，并且能夠明顯抑制SDC4的表達水平，病毒復制水平也明顯下降。因此，本發明的提出為犬瘟熱的防控提供了一種新的、有效的技術手段。

技術領域

本發明涉及一種siRNA序列在抑制病毒復制中的應用，特別涉及多配體蛋白聚糖4siRNA序列在抑制犬瘟熱病毒復制中的應用。本發明屬于生物技術領域。

背景技術

犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)感染犬所引起的急性、高度接觸性傳染病。自1809年首次報道以來,該病已呈世界性分布，給養犬業、毛皮動物養殖業和野生動物保護業造成巨大危害。CDV屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒屬(Morbillivirus)。盡管CDV依據H 基因氨基酸序列相似度小于95％區分為亞洲1-4型(Asia-1-4)，美洲1-5型 (America-1-5)，南美1-3型(SouthAmerica-1-3),非洲1-2型(Africa-1-2)，歐洲野生動物型(European Wildlife)，北極型(Arctic-like)及巖石型(Rockborn-like) 17個不同基因亞型，但公認只有一個血清型。

CDV感染造成犬臨床表現為高熱、腹瀉、免疫抑制及腦炎等癥狀，與麻疹病毒相似，可引起高致死率，CDV感染腦部形成亞急性硬化性泛腦炎(SSPE)，多灶性脫髓鞘病變等，犬星形膠質細胞是犬瘟熱病毒感染中樞神經系統的靶細胞，但其具體機制不清楚。多配體蛋白聚糖4(syndecan-4，SDC4)是一種跨膜(I 型)硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，是調節一系列信號轉導的各種細胞因子和趨化因子的受體(Kaneider等，2005)。本發明發明人在前期對CDV感染星形膠質細胞轉錄組信息分析基礎上，發現在感染細胞中SDC4表達升高，因此，本研究以SDC4 為研究對象，觀察RNA干擾(RNA interfering，RNAi)抑制SDC4表達對CDV 感染星形膠質細胞的影響，并進一步研究其作用機制，以期為CDV的防控提供理論依據。

發明內容

本發明的目的在于提供一種犬瘟熱病毒的抑制劑。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明發明人在前期對犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)感染星形膠質細胞轉錄組信息分析基礎上，發現在CDV感染細胞中SDC4表達升高，因此，本發明以SDC4為研究對象，觀察RNA干擾(RNA interfering，RNAi)抑制 SDC4表達對CDV感染星形膠質細胞的影響，通過Western Blot和qRT-PCR方法檢測，結果顯示，與對照組相比，si-SDC4組SDC4表達受到抑制，病毒復制水平也明顯下降。

在上述研究的基礎上，本發明提出了多配體蛋白聚糖4(syndecan-4，SDC4) 的siRNA序列在制備抑制犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)復制藥物中的應用。

其中，優選的，所述的多配體蛋白聚糖4(syndecan-4，SDC4)的siRNA序列如下所示：

5’GCAACAUCUUUGAGAGGACTT3’；

5’GUCCUCUCAAAGAUGUUGCTT3’。

其中，優選的，所述的多配體蛋白聚糖4的siRNA序列能夠抑制犬瘟熱病毒在星形膠質細胞中的復制。

其中，優選的，所述的多配體蛋白聚糖4的siRNA序列通過降低多配體蛋白聚糖4的表達水平進而達到抑制犬瘟熱病毒復制的作用。

相較于現有技術，本發明的有益效果是：