[發明專利]利用非變性膠從少量復雜蛋白樣本中初步分離未知蛋白酶的方法

在審

• 申請號: 202011543341.5
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112522241A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 鄭翔;吳芳彤;秦艷梅;馬清河
• 申請（專利權）人: 河北省微生物研究所
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

本發明屬于蛋白的提取及分離純化，特別是指一種利用非變性膠從少量復雜蛋白樣本中初步分離未知蛋白酶的方法。包括將復雜蛋白樣本和非變性蛋白膠上樣緩沖液混勻后分別上樣到非變性蛋白膠兩側，在其中一側的樣本旁上樣非變性蛋白標記后電泳；將電泳完畢的蛋白膠從中間切開分別置于考馬斯亮藍染液及脫脂牛奶培養基內等工藝步驟。本發明解決了目前少量復雜蛋白質分離純化因目的蛋白信息不明確而難于進行等技術問題。不必獲得蛋白酶的相關信息即可初步分離未知蛋白酶，僅需混合體系中含有蛋白酶活性即可快速鑒別蛋白酶，將其切膠回收初步分離后用于后續研究，對于發現未知蛋白酶具有重要意義。

技術領域

本發明屬于蛋白的提取及分離純化，特別是指一種利用非變性膠從少量復雜蛋白樣本中初步分離未知蛋白酶的方法。

背景技術

蛋白的提取及分離純化是蛋白質工程的主要內容之一，是研究蛋白的結構與功能的重要環節。蛋白的提取與純化是指將蛋白從細胞或其他含蛋白的原料中提取出來，再與雜質分開而獲得符合研究要求的蛋白制品的過程。主要內容包括細胞破碎，蛋白的提取，分離純化(離心分離、過濾與膜分離、沉淀分離、層析分離、電泳分離、萃取分離)濃縮及干燥等。

蛋白質和多肽產物的提取和分離純化基本原則是從復雜的多組分物質中將目標組分分離,盡可能多的獲得具有生物學活性的蛋白和多肽產物,并增加目標產物的純度和比活性。蔣世強在《重組蛋白純化研究進展》總結了根據目標蛋白的物理或化學性質的不同，可以有針對性地采取如下表中的分離純化方法。

表1依據蛋白特性采用的分離純化方法

蛋白質特性	分離純化方法
電荷	離子交換層析
分子大小	凝膠過濾層析、超濾離心
疏水性	疏水層析、反相色譜
親和性	親和層析、金屬螯合親和層析
溶解度	鹽沉淀、有機物沉淀、雙液相萃
等電點	等電點沉淀

比如，梁欣在《復雜蛋白質樣品中目標組分柱層析分離純化策略研究》中用柱層析的方法為復雜蛋白質混合樣品中目標蛋白的分離純化提供試驗方案。趙玉娟在《凝膠色譜法測定乳清中主要蛋白的相對分子量及其分布》中用凝膠色譜實驗對球蛋白進行分離純化及定量。葉子堅在《電泳法測定基因工程蛋白分子量和純度及方法比較》用SDS-PAGE技術用于基因工程蛋白純度及分子量的試驗。陳璐在《Tricine－SDS－PAGE分析極低分子量蛋白的條件優化》對3-20kDa的低分子量蛋白質進行了很好的分離。