[發(fā)明專利]一種金黃色葡萄球菌檢測裝置及方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011542645.X | 申請日： | 2020-12-23 |
| 公開（公告）號： | CN112748172B | 公開（公告）日： | 2023-02-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 萬海方;趙杰;黃焱明;陶凡 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州市紅十字會醫(yī)院 |
| 主分類號： | G01N27/48 | 分類號： | G01N27/48 |
| 代理公司： | 杭州天麟知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33374 | 代理人： | 占宇 |
| 地址： | 310000 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 金黃色 葡萄球菌 檢測 裝置 方法 | ||
1.一種金黃色葡萄球菌檢測方法，其特征在于，基于一種金黃色葡萄球菌檢測裝置，所述金黃色葡萄球菌檢測裝置包括計算機(1)、數(shù)據(jù)采集器(2)、電化學(xué)工作站(3)、第一檢測模塊和第二檢測模塊，所述第一檢測模塊包括第一檢測容器(4)和第一電化學(xué)傳感器陣列，所述第二檢測模塊包括第二檢測容器(5)和第二電化學(xué)傳感器陣列，所述第一電化學(xué)傳感器陣列包括第一工作電極(6)、第一對電極(7)、第一參比電極(8)，所述第二電化學(xué)傳感器陣列包括第二工作電極(9)、第二對電極(10)、第二參比電極(11)，所述第一工作電極(6)上未培育金黃色葡萄球菌抗原，所述第二工作電極(9)上培育有金黃色葡萄球菌抗原，所述第一檢測容器(4)、第二檢測容器(5)內(nèi)都容納有緩沖溶液，所述第一檢測容器(4)內(nèi)、第二檢測容器(5)內(nèi)都設(shè)有可見光源，所述電化學(xué)工作站(3)分別與第一電化學(xué)傳感器陣列、第二電化學(xué)傳感器陣列、數(shù)據(jù)采集器(2)的輸入端電連接，所述數(shù)據(jù)采集器(2)的輸出端與計算機(1)電連接；
所述第二工作電極上培育金黃色葡萄球菌抗原的方法如下：
N1：將銀漿SL和羧甲基殼聚糖CMC按照質(zhì)量比1∶3比例混合制成10ml溶膠水溶液，接著超聲分散15min，稱取5mg的氧化石墨烯GO溶解于溶膠水溶液中，超聲震蕩25min，得到GO/SL-CMC混合液，取1.5μL的GO/SL-CMC混合液滴加到第二工作電極表面，于室溫干燥5h，在第二工作電極上形成一層GO/SL-CM薄膜；
N2：將第二工作電極置入1mmol/l的硫堇Thi溶液里浸泡約4min，將硫堇Thi組裝在第二工作電極表面，用蒸餾水沖洗第二工作電極，洗掉多余的硫堇Thi，將第二工作電極靜置干燥；
N3：用PBS緩沖液將金黃色葡萄球菌多克隆抗體溶液稀釋300倍后取4μl修飾在干燥后的第二工作電極上，在干燥皿中靜置干燥；
N4：取3.5μl金黃色葡萄球菌抗原溶液滴涂在第二工作電極上，在30℃條件下培育25min，用蒸餾水洗掉第二工作電極上未結(jié)合的金黃色葡萄球菌抗原；
N5：將納米TiO2與水以0.1∶20的重量比混合后超聲均質(zhì)，然后取5μl滴涂在銅膜電極上，晾干；
所述金黃色葡萄球菌檢測方法包括以下步驟：
S1：配置不同濃度的金黃色葡萄球菌懸浮液，檢測每個濃度的金黃色葡萄球菌懸浮液對應(yīng)的特征值Y，將這些值進行擬合得到濃度計算公式：Y＝0.13×LgX-0.01，X為金黃色葡萄球菌懸浮液的濃度；
S2：取待測金黃色葡萄球菌懸浮液，檢測其對應(yīng)的特征值Y，根據(jù)濃度計算公式：Y＝0.13×LgX-0.01，計算出待測金黃色葡萄球菌懸浮液的濃度；
所述檢測某個濃度的金黃色葡萄球菌懸浮液對應(yīng)的特征值Y的方法包括以下步驟：
M1：采用同樣方法對該濃度的金黃色葡萄球菌懸浮液進行m次檢測，每次檢測的檢測步驟如下：
在未使用過的第一工作電極、未使用過的第二工作電極上都滴加2.5μl該濃度的金黃色葡萄球菌懸浮液，靜置25分鐘后，將第一電化學(xué)傳感器陣列插入第一檢測容器內(nèi)的緩沖溶液中、將第二電化學(xué)傳感器陣列插入第二檢測容器內(nèi)的緩沖溶液中，并采用循環(huán)伏安法從小到大依次切換n種不同的掃描速率進行檢測，得到n個還原峰電流差值ΔIpw1、ΔIpw2…ΔIpwn，ΔIpwn＝Ip1wn-Ip2wn，ΔIpwn為第w次檢測中第n種掃描速率下的還原峰電流差值，Ip1wn為第w次檢測中第n種掃描速率下第一電化學(xué)傳感器陣列對應(yīng)的還原峰電流值，Ip2wn為第w次檢測中第n種掃描速率下第二電化學(xué)傳感器陣列對應(yīng)的還原峰電流值，1≤w≤m；
M2：根據(jù)m次檢測的檢測數(shù)據(jù)構(gòu)建出特征矩陣D，
M3：將特征矩陣D的每行數(shù)據(jù)進行二次樣條插值，得到m個與每行數(shù)據(jù)對應(yīng)的曲線x(t)，對m個曲線x(t)進行同樣的數(shù)據(jù)處理，得到m個特征值F，對每個曲線x(t)進行的數(shù)據(jù)處理包括以下步驟：將x(t)帶入非線性定向飽和共振模型中，飽和勢函數(shù)檢測信號載入分量ing(t)＝cos(kt+η)+x(t)，
其中，t為插值變量，k為實參數(shù)，η為實參數(shù)，nois(t)為功率譜密度函數(shù)不平坦的有色噪聲，P為實參數(shù)，Q為實參數(shù)，繪制非線性定向飽和共振模型的共振曲線，取共振曲線中的最大峰值作為共振特征值E，
通過公式計算得到特征值F；
M4：將m個特征值F取平均，得到的平均值即為特征值Y的值。
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