[發明專利]測3種雌激素的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法

有效

• 申請號: 202011541839.8
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112611827B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 王獻;范茹婷;肖華明
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/88
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 余曉雪

1.測3種雌激素的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，

所述3種雌激素為雌酮、雌二醇和雌三醇；

具體包括如下步驟：

S1、將待測血清樣品與穩定同位素內標溶液混勻后，通過液-液萃取提取目標激素；

S2、采用3-甲基-8-喹啉磺酰氯進行衍生化反應；

S3、采用超高效液相色譜-串聯質譜技術對所述衍生化反應后的待測液進行檢測；

步驟S2中，所述衍生化反應具體為，加入3-甲基-8-喹啉磺酰氯的丙酮溶液，隨后通過加入碳酸鹽緩沖溶液調節pH為8.5-11，混勻后置于恒溫振蕩器中，在30-70℃下避光震蕩反應5-120min；

步驟S1中，所述液-液萃取采用乙酸乙酯作為萃取劑；

所述超高效液相色譜條件為：

色譜柱為C18柱；

流動相A為0.1％v/v甲酸/水溶液；

流動相B為0.1％v/v甲酸/甲醇溶液；

流動相梯度洗脫參數為：

。

2.根據權利要求1所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，步驟S2中，所述3-甲基-8-喹啉磺酰氯的丙酮溶液的濃度為1-10mg/mL。

3.根據權利要求1所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于， 所述質譜條件具體為：

電離源為電噴霧電離ESI源，其中霧化氣流量為2.5-3.6L/min，干燥氣流量為8-13.5L/min，加熱氣流量為9-15L/min，接口溫度280-350℃，DL溫度235-280℃，加熱塊溫度380-450℃；

質譜檢測參數為：

。

4.根據權利要求1所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，所述液-液萃取具體包括：向待測血清樣品與穩定同位素內標溶液的混合溶液中加入0.8-1.2mL乙酸乙酯，渦旋后在8000-12000r/min下離心2-4min，取上層清液，N₂吹干；

和/或，步驟S3中，還包括，在檢測前，將所述衍生化反應后的檢測液置于3-5℃下冷卻25-35s，隨后離心取上清液進行檢測。

5.根據權利要求1所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，所述流動相梯度洗脫參數為：

。

6.根據權利要求1所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，還包括，結合步驟S3得到的檢測結果和各雌激素的標準工作曲線，測定各雌激素在血清中的含量值。

7.根據權利要求6所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，所述雌激素的標準工作曲線采用同位素內標定量法制得，具體步驟包括，取已知且不同濃度的雌酮、雌二醇和雌三醇的甲醇溶液，分別與內標溶液和空白血清基質混合，經過S1所述步驟得到不同濃度的標準待測液，使用化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜技術對所述不同濃度的標準待測液分別進行檢測，以標準待測液中各雌激素與內標物峰面積比為Y軸，標準待測液中各類固醇激素濃度為X軸，得到各類 固醇激素的標準工作曲線；所述化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜技術中的檢測條件為步驟S3中的檢測條件。

8.根據權利要求7所述的化學衍生-超高效液相色譜-串聯質譜法，其特征在于，所述空白血清基質為0.1％牛血清白蛋白溶液。