[發明專利]新型冠狀病毒DNA實時熒光環介導等溫擴增試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202011540939.9
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112575121A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 周贊虎;何王福;徐敦明;張鳴青;莊燕煌;何藝貞;陳春香;林子旭
• 申請（專利權）人: 漳州海關綜合技術服務中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 徐銘煌

本發明涉及生物檢測試劑及其檢測方法，具體涉及新型冠狀病毒DNA實時熒光環介導等溫擴增試劑盒及其檢測方法；本發明根據世界衛生組織公布的新型冠狀病毒的檢測特異序列ORF1ab為靶基因，根據該靶基因的反轉錄后的DNA序列，設計了2套新型冠狀病毒LAMP檢測的特異性引物和環介導等溫擴增反應體系，任何一套引物均能在該反應體系里快速擴增檢測新型冠狀病毒，該試劑盒檢測新型冠狀病毒DNA具有高特異性和高靈敏度，低成本、快速且操作簡便等特點。

技術領域

本發明涉及生物檢測試劑盒及其檢測方法，具體涉及新型冠狀病毒DNA實時熒光環介導等溫擴增試劑盒及其檢測方法。

背景技術

盡早發現和確診新型冠狀病毒病例，才能阻斷病毒進一步傳播。目前市面上基本都是采用熒光定量PCR鑒定新型冠狀病毒，整個鑒定周期在2個小時以上，普通醫院較少配備熒光定量PCR儀，疑似病例不能得到有效確診，不但延誤病情，而且沒及時有效的隔離會進一步傳染他人，所以研發能快速確診新型冠狀病毒檢測試劑盒是目前社會之急需。

新型冠狀病毒是一種RNA病毒，目前的檢測步驟分2步：1.RNA反轉錄成DNA(一般在5min-10min之間，只需恒溫，不需要PCR儀等專用設備)，2.用實時熒光定量PCR檢測反轉錄后的DNA(一般在90min-120min之間)，整個鑒定周期在2個小時以上，其中實時熒光定量PCR檢測反轉錄后DNA耗時最長，實時熒光環介導等溫擴增(Quantitative Real time loop-mediated isothermal amplification)是一種新的核酸擴增方法，該方法能夠在恒溫條件下特異、高效、快速地鑒定DNA，特別適用于大量樣品的快速檢測和篩選。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速、特異性強且成本低的實時熒光環介導等溫擴增新型冠狀病毒檢測盒及其檢測方法，為新型冠狀病毒確診提供新的科學依據。

本發明提供新型冠狀病毒DNA實時熒光環介導等溫擴增試劑盒，該試劑盒包含：a.引物組；b.DNA聚合酶；c.LAMP反應液；d.陽性對照物和陰性對照物；e.熒光染料。

引物組包括兩套等效的引物組，每套引物組均包含一對外引物即F3和B3、一對內引物即FIP和BIP和一對環引物即LoopF和LoopB，其核苷酸序列分別如下所示：

第一套引物組：

F3:GTTGCCACATAGATCATCCA

B3:ACATCAGTACTAGTGCCTGT

FIP：GCCATAACCTTTCCACATACCGAACTTGTGCTAATGACCCTG

BIP：GCGAACCCATGCTTCAGTCATAAGACGGGCTGCACTTA

LoopF:CAGACGGTACAGACTGTGTT

LoopB:TTTAAACGGGTTTGCGGTG

第二套引物組：

F3:AAGCCTCTTCTCGTTCCT

B3:CTCAGCAGCAGATTTCTTAGT

FIP：AGCAGCATCACCGCCATTAATTCAACTCCAGGCAGC

BIP：GCTTTGCTGCTGCTTGACAGTTGTTGGCCTTTACCAGAC

LoopF:CCAGCCATTCTAGCAGGAG

LoopB:ATTGAACCAGCTTGAGAGCA

檢測試劑盒包含以上兩套引物組中的其中一套，以上兩套引物組任選一套均可。其中，外引物、內引物、環引物的摩爾比為：1:8:4。