[發明專利]一種地頂孢霉培養物的制備方法

有效

• 申請號: 202011536068.3
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112538436B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 江國托;劉艷;單春喬;劉秋晨;李娟;顧艷麗;劉恩
• 申請（專利權）人: 江蘇三儀生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A23K10/18;A23K50/75;C12R1/645
• 代理公司: 南京聚匠知識產權代理有限公司 32339
• 代理人: 沈菊

1.一種地頂孢霉培養物的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1.將地頂孢霉菌種接種于固態培養基上，于15-28℃培養4-6天，待菌絲長滿平板并產孢即可，得到一級菌種，固體培養基的組成為蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄0.2％，MgSO₄ 0.03％，CaCO₃ 0.05％，ZnSO₄ 0.01％，乙酸鈉0.15％，瓊脂粉2％，其余為水；固體培養基的pH值為6.5；

S2.將步驟S1所得一級菌種接種于搖瓶中的種子培養基，15-28℃、100-200轉/分培養3-5天得到二級種子液，種子培養基的裝液量為搖瓶體積的10-30％，種子培養基的組成為蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.03％，CaCO₃ 0.05％，ZnSO₄0.01％，乙酸鈉0.15％，其余為水；種子培養基的pH值為6.5；

S3.將步驟S2所得二級種子液以10-30％的接種量接種于發酵培養基中，15-28℃發酵5-7天得到三級種子液，發酵過程中pH值為7-8，攪拌轉速為100-200轉/分，溶氧濃度為20-40％，發酵培養基的組成為蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄0.03％，CaCO₃0.05％，ZnSO₄ 0.01％，乙酸鈉0.15％，其余為水；發酵培養基的pH值為6.5；

S4.將步驟S3所得三級種子液以10-30％的接種量接種于發酵罐的液體發酵培養基中，15-28℃發酵2-3天得到發酵液，發酵過程中pH值為6-7，攪拌轉速為100-150轉/分，溶氧濃度為20-40％，流量為20-40cm³/h，發酵罐內壓力為0.04-0.06MPa，液體發酵培養基的組成為蔗糖1-3％，大豆糖蜜0.5-1.5％，酵母粉1-2％，大豆蛋白胨1-2％，K₂HPO₄ 0.1-0.3％，MgSO₄0.02-0.04％，CaCO₃ 0.04-0.06％，ZnSO₄ 0.01％，其余為水；液體發酵培養基的pH值為6.5；

S5.將復合酶液接種于步驟S4所得發酵液中，25-70℃、pH值為3-7條件下酶解0.5-2小時得到酶解液，復合酶液由β-葡聚糖酶、酸性蛋白酶、pH值為5.5的蒸餾水按照1g:1g:10mL的比例混合而成，復合酶液與發酵液的體積比為1:200；

S6.將保護劑加入步驟S5所得酶解液中，混合均勻得到混合液，將混合液噴霧干燥得到地頂孢霉培養物，保護劑的重量份組成為葡萄糖40份，水溶性淀粉55份，木瓜籽提取物5份；保護劑與酶解液的重量比為1:20，噴霧干燥時的進風溫度為120-130℃，進料流量為100-120kg/小時，出風溫度為55-65℃，所述木瓜籽提取物的制備步驟為：

將木瓜籽烘干后粉碎得到木瓜籽粉，將木瓜籽粉加入石油醚中超聲提取45分鐘得到提取液一，將提取液一離心分離10分鐘得到上清液一，將上清液一旋蒸濃縮得到木瓜籽粗提物；將木瓜籽粗提物加入無水乙醇中，80℃下水浴攪拌10分鐘后靜置分層，取上層醇相加入氫氧化鈉后80℃下水浴攪拌1小時得到提取液二，將提取液二離心分離10分鐘得到上清液二，將上清液二旋蒸濃縮得到木瓜籽提取物。

2.根據權利要求1所述的一種地頂孢霉培養物的制備方法，其特征在于：所述木瓜籽提取物的制備步驟中：木瓜籽粉與石油醚的比例為1:17g/mL，超聲提取時的超聲功率為200W；木瓜籽粗提物、無水乙醇、氫氧化鈉的比例為50g:80mL:1g；提取液一、提取液二離心分離時的離心速度均為8000轉/分。