[發明專利]一種雙磁粒介入的DNA提取純化方法

有效

• 申請號: 202011532811.8
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112501161B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 賈麗;付云海
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿

1.一種DNA提取純化方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）取樣品裂解液，加入吸附液和NaCl溶液混勻，再加入GO-MPs懸浮液，孵育至少10min，然后做磁分離，取上清液；

（2）向上清液中加入polyDOPA-MPs懸浮液，孵育至少10 min，然后做磁分離，棄上清液，所得沉淀用乙醇溶液洗滌，然后于室溫下干燥；再加入洗脫液，孵育至少15 min，使吸附的DNA從polyDOPA-MPs上洗脫下來，隨后進行磁分離，取上清液，即含有純化后的DNA；

所述GO-MPs的制備方法，包括以下步驟：

將三氯化鐵溶解于乙二醇中，加入無水乙酸鈉和聚乙二醇4000混合均勻，將得到的混合物升溫至160～220℃反應8～22 h，得到PEG-MPs；將合成的PEG-MPs加入GO溶液中，加熱攪拌后，分離得到GO-MPs；

所述polyDOPA-MPs的制備方法，包含以下步驟：

將三氯化鐵溶解于二甘醇-乙二醇混合溶劑中，加入無水乙酸鈉和丙烯酸鈉混合均勻，將得到的混合物升溫至160～220℃反應10～20 h，得到COOH-MPs；將合成的COOH-MPs加入多巴的堿性溶液中，加熱攪拌，分離，得到polyDOPA-MPs；

所述的PEG-MPs和GO的質量比為(1~4):1；

所述的polyDOPA-MPs的制備過程中的混合物中，無水乙酸鈉和丙烯酸鈉的質量比為(1～3):1；

所述的二甘醇-乙二醇混合溶劑中，二甘醇與乙二醇的體積比為(1～4):1；

所述的多巴與COOH-MPs的質量比為(2～4):1。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述的吸附液為Tris-HCl-EDTA緩沖液，其中Tris的濃度為10 mmol/L，EDTA的濃度為1 mmol/L，pH值為2.8～6.8。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）所述的洗脫液為Tris-HCl-EDTA緩沖液，其中Tris的濃度為10 mmol/L，EDTA的濃度為1 mmol/L，pH值為8.8～10.8。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述的樣品裂解液，由以下步驟制得：

A、若樣品為細菌，則取細菌培養液，離心取沉淀，加入裂解液；若是其他固體樣品，則先在液氮保護下碾磨至粉末，加入裂解液；

B、加入裂解液之后，37℃水浴孵育至少1 h，然后加入NaCl溶液充分混合，將混合物離心，上清液即為組織裂解液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述的裂解液含有25 mmol/L Tris-HCl、20 mmol/L NaAc、1 mmol/L EDTA和1% SDS，pH值 7.8。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的GO-MPs懸浮液和polyDOPA-MPs懸浮液，是分別將GO-MPs和polyDOPA-MPs分散在Tris-HCl-EDTA緩沖液中，其濃度為50～300mg/mL。