[發(fā)明專利]水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011531956.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN112680537B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊勤忠;劉樹芳;董麗英;周伍民;李迅東;曾莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 云南凌云律師事務(wù)所 53207
• 代理人: 康珉

1.一種水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-1，其特征在于，所述水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-1的片段長度為132bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

2.一種水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-2，其特征在于，所述水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-2的片段長度為143bp，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.權(quán)利要求要求1所述的水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-1在水稻抗稻瘟病育種中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求要求2所述的水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-2在水稻抗稻瘟病育種中的應(yīng)用。

5.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1所述的水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-1的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)為Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物，所述Pi57-InDel-1FW引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Pi57-InDel-1RV引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

6.用于擴(kuò)增權(quán)利要求2所述的水稻廣譜抗稻瘟病基因Pi57的共分離分子標(biāo)記Pi57-InDel-2的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)為Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物，所述Pi57-InDel-2FW引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，Pi57-InDel-2RV引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

7.權(quán)利要求5所述的引物對(duì)在水稻抗稻瘟病育種中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求6所述的引物對(duì)在水稻抗稻瘟病育種中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于，

(1)當(dāng)用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中擴(kuò)增出132bp的片段，則目標(biāo)水稻材料含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)；用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中擴(kuò)增出129bp的片段，則目標(biāo)水稻材料不含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)；用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中同時(shí)擴(kuò)增出132bp和129bp兩個(gè)片段，則目標(biāo)水稻材料為含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)的雜合水稻材料；

或(2)用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中擴(kuò)增出143bp的片段，則目標(biāo)水稻材料含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)；用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中擴(kuò)增出185bp的片段，則目標(biāo)水稻材料不含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)；用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)水稻材料，目標(biāo)水稻材料中同時(shí)擴(kuò)增出143bp和185bp兩個(gè)片段，則目標(biāo)水稻材料為含有抗稻瘟病基因Pi57位點(diǎn)的雜合水稻材料。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：

用Pi57-InDel-1FW引物和Pi57-InDel-1RV引物的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系20μL，其中含有2×ES Taq Master Mix 10μL、10μM Pi57-InDel-1FW引物1μL、10μM Pi57-InDel-1RV引物1μL、10ng/μL模板DNA 1μL，ddH₂O 7μL；PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，61℃退火30s，72℃延伸1min，共32個(gè)循環(huán)；最終72℃延伸5min；

用Pi57-InDel-2FW引物和Pi57-InDel-2RV引物的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系20μL，其中含有2×ES Taq Master Mix 10μL、10μM Pi57-InDel-2FW引物1μL、10μM Pi57-InDel-2RV引物1μL、10ng/μL模板DNA 1μL，ddH₂O 7μL；PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共32個(gè)循環(huán)；最終72℃延伸5min。