[發明專利]一種葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖的檢驗方法

在審

• 申請號: 202011528892.4
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112730734A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 何志華;賈惠麗;朱明偉;樊永樂;胡佳輝;樊希文
• 申請（專利權）人: 河南星漢生物科技有限公司
• 主分類號: G01N31/16
• 分類號: G01N31/16;G01N1/28
• 代理公司: 鄭州隆盛專利代理事務所(普通合伙) 41143
• 代理人: 姜新宇

本發明公開了一種葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖的檢驗方法，涉及乳酸檢測方法領域，包括步驟一：提取離心發酵液上清液A；步驟二：稀釋上清液A，將步驟一制得的上清液A，進行5?50倍數的稀釋，放置入生物傳感儀檢測葡萄糖濃度；步驟三：滴定實驗，參照生物傳感儀葡萄糖濃度做滴定；步驟四，濃度計算，當發酵液中還原糖含量≤2.5％時，S＝(V0?V)/0.2×0.1，可大幅度提高葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖含量的準確性和平行性。

技術領域

本發明涉及乳酸檢測方法領域，尤其涉及一種用于檢測葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖的方法。

背景技術

乳酸(2-羥基丙酸)是一種化合物，生產方法多為細菌發酵法，發酵法的原料一般是玉米淀粉，甘薯淀粉，大米淀粉，也有纖維素等作為原料，主要途徑是糖在乳酸菌作用下調節pH6左右，發酵周期35-40小時，,在乳酸菌發酵產生乳酸的過程中，通過對發酵液中殘糖的測定，可以控制最佳發酵結束時間，目前對發酵液中殘糖量的測定方法費林定糖法，費林定糖法中費林氏與還原糖反應受溶液酸堿度、加熱溫度、攪拌力度、蒸發量、滴定速度等因素影響，而且滴定終點的判斷受人為因素影響較大，同時發酵液中的色度及酸堿度會影響費林定糖法的終點判讀，影響測定結果的準確性。

發明內容

本發明的目的在于解決現有發酵液中殘糖量的測定方法不準確的問題，提供一種葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖的檢驗方法，可大幅度提高葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖含量的準確性和平行性。

為了實現以上目的，本發明采用的技術方案是：

一種葡萄糖發酵乳酸中發酵液殘糖的檢驗方法，包括以下步驟：

步驟一：提取離心發酵液上清液A，待葡萄糖發酵乳酸發酵35h時，取發酵液20ml放入離心機內，在轉速為3200～3800r/min的離心條件下，離心4～6min，獲得上清液A；離心的目的是因為發酵液較渾濁，直接用發酵液稀釋會影響生物傳感分析儀的檢測結果，更會堵塞管道。

步驟二：稀釋上清液A，將步驟一制得的上清液A，進行5-50倍數的稀釋，放置入生物傳感分析儀檢測葡萄糖濃度；因生物傳感儀的檢測葡萄糖濃度范圍在1g/L,稀釋在儀器的檢測范圍才能使得檢測結果誤差在0.2％以下。

步驟三：滴定實驗，參照生物傳感儀檢測的葡萄糖濃度來做滴定；

1)空白滴定，在干燥的250mL錐形瓶中加水10mL、20％KOH試液3mL、鈣黃綠素指示劑22mg，用0.05mol/L的EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)標準滴定溶液滴定，背光觀察，當黃綠色熒光轉變為橙色時即達終點停止滴定；再精確加入堿性酒石酸銅試劑乙、甲液各5mL，玻璃珠數顆，再預加入1g/L的葡萄糖標準溶液10mL，搖勻置于電爐加熱使其在2分鐘內沸騰，沸騰30秒后，勻速滴入葡萄糖標準溶液直到由藍色變成無色，即為滴定終點。要保證整個滴定過程3分鐘內完成，記錄沸騰前后共耗用1g/L葡萄糖標準溶液的毫升值V0；

2)預備滴定，精密吸取發酵液0.20mL，加水10mL、20％KOH試液3mL、鈣黃綠素指示劑22mg，用0.05mol/L的EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)標準滴定溶液滴定，背光觀察，當黃綠色熒光轉變為橙色時即達終點停止滴定。再精確加入堿性酒石酸銅試劑乙、甲液各5mL，玻璃珠數顆，根據生物傳感儀葡萄糖含量的高低預加合適的葡萄糖標準溶液數毫升8mL，搖勻置于電爐上加熱使其在2分鐘內沸騰，沸騰30秒后，用葡萄糖標準溶液1g/L勻速滴定直到由藍色變成無色，即為滴定終點。要保證整個滴定過程3分鐘內完成，記錄沸騰前后共耗用1g/L葡萄糖標準溶液的毫升值Vm做用來正式滴定參考用；